Nalidiksik asit ve uv ışığı uygulamasının escherichia coli K12 şuşlarında DNA onarımı ve rekombinasyona etkileri
- Global styles
- Apa
- Bibtex
- Chicago Fullnote
- Help
Abstract
IV ÖZET Bu çalışmada atasal E. coli K12 susundan türemiş bazı E. coli K12 mutantları (KL386recA, AB2470recB21), KL398mutS, 2110mutH mutatorları ve bunların yaban tiplerinin (HfrCavalli, KL14, KL398) DNA onarımı, rekombinasyona et kileri karşılaştırıldı. Escherichia coli recA gen ürünü, RecA proteini olarak ad- landırılır.İn vitro şartlar altında yapılan çalışmalardan elde edilen verilere göre, RecA proteinin ATP varlığında DNA'nın tek iplikçiğine bağlandığı ve homolog eşleşmeyi (sinapsis) yürüttüğü bilinmektedir. RecA proteinin genetik rekombinas- yonda esaslı rol oynadığı belirtilmektedir. Genel rekombi- nasyon mekanizması için gerekli olan recA+ genotipi ve bunun mutantı recA` ile yapılan konjugasyon deneyleri sonu cunda, (HfrxF`) recA` genotipinde, rekombinasyon veriminin yok denecek düzeyde gerçekleştiği gözlendi. recB` mutant- larında rekombinasyon veriminin yok olmadığı, ancak yaban tipi recB+ genotipine nazaran 100 kat azaldığı tespit edildi. UV ışını ile yapılan deneylerde; recB` genotipinin UV'ye, ya ban tipi recB+ genotipine göre daha hassas olduğu, ancak recB` genotipinin konjugasyonla recB+ genotipini tekrar ka zandığında UV'yi karşı dayanıklılığının yaban tip düzeyine e- riştiği gözlendi. Konjugasyonla elde edilen rekombinant tipleri gen bağlılığı (linkage) yönünden incelendiğinde, E. coli K12 gen haritasına uygunluk gösterdi. Çalışmanın özgün yanı ise, E. coli K12 suşlarında nalidiksik asit mutasyonu gyrA (nalA) yaratıldığında, bunun rekombi nasyon, DNA onarımı ve mutasyon mekanizmalarını nasıl et kileyeceği idi. Bilindiği gibi E. coli giraz (gyrase) enzimi 400 K. dal tetram- er yapısında olup gyrA (nalA) ve gryB (nalB) genlerinin ürü-nüdür. Nalidiksik asit gyrA geni aktivitesini inhibe eden bir madde olduğundan nalidiksik asite rezistan olan suşlar da, nalidiksik asit varlığında giraz enziminin de inhibe olduğu düşünülür. UV ışını DNA da timin dimerleri oluşturarak mu- tajenik etki gösterir. Giraz enzim aktivitesi nalidiksik asit tarafından inhibe edildiğinden E. coli K12 suşlarının farklı UV ışını dozlarından sonra canlı hücre sayılarında hızlı dü şüş oldu. Zaten giraz enzimi replikasyon transkripsiyon, re- kombinasyon ve DNA onarımında görev yapar. Nitekim gyrA mutasyonu taşıyan suşlar atasal yaban tipleriyle karşılaştı rıldığında rekombinasyon verimi, DNA onarımı ve mutasyon sıklığında daha düşük değerler verdiler. Bu sonuçlar giraz enzimin inhibisyonuna bağlandı. Vi ABSTRACT In this study derivative of some of the E. coli K12 recombi nation mutans (KL386recA, AB2470recB21, KL398mutS, 2110mutH) and their wild types has been compared for their effects on recombination and DNA repair. The product of recA+ gene of Escherichia coli is called RecA protein. According to the results of experiment done under in vitro conditions, it is known that recA protein is bound to the single strand DNA and it promotes homologous pairing (synapsis) in the presence of ATP. It was proposed that recA protein plays an essential role in genetic recombination. As the result of conjugation experiments done with recA+ gene- type, necessary for general recombination and its mutant recA`, it was observed that the productivity of the recombi nation of the (HfrxF`) recA` genotype was formed at a very low level. It was seen that in the recB` mutants, the produc tivity of the recombination was not disappear, but it was 100 fold decreased with respect to wild type recB+. Experi ments done by the use of UV light show that recB` genotype was more sensitive to UV light than wild genotype recB+, however when recB` genotype was converted to recB+ geno type by conjugation it was observed that its resistance to UV light reached to that of wild type. Recombinants obtained after conjugation showed convenien ce with the map of E. coli K12 gene in terms of gene linkage. The aim of this research is to show how the recombination and mutational mechanisms will be effected when nalidixic acid mutation, gyrA ( nalA), is introduced into E. coli K12 strains. As it known that E. coli gyrase appears to be a 400 K. dal tetramer of gyrA (nalA) and gryB (nalB) gene products. Since the gyrase A activitiy is inhibited by nalidixic acid,Vii Since the gyrase A activitiy is inhibited by nalidixic acid, one woud expect that a strain resistant to nalidixic acid has also no gryase activitiy. UV-light shows mutagenic effects by forming thymine dimers in DNA. As gyrase enzyme activi tiy was inhibated by nalidixic acid it was seen that rapid decreases occurs in the amount of the living cells of the E. coli K12 strains with respect to different UV-light dozes. Gyrease is involved in DNA replication.transcription, recom bination and DNA repair. In fact when the strains which carry gryA mutation are compared with wild type, they all gave low values in recombination prouctivity, DNA repair and mutation frequency. These results are explained by grase inhibition.
Collections