Tortum elmasından (Malus sylvestris.) polifenol oksidaz enziminin afinite kromatografisi ile saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı kimyasalların enzim aktivitesi üzerine etkisinin incelenmesi
- Global styles
- Apa
- Bibtex
- Chicago Fullnote
- Help
Abstract
Polifenol oksidaz enzimi bazı sebze ve meyvelerde enzimatik kararmaya neden olur. Bu çalışmada, PFO enzimi Tortum elmasından (Malus sylvestris.) Sepharose 4B-L-tirozin-p-aminobenzoik asit afinite kolonu ile ilk kez saflaştırıldı. Enzimin saflığının kontrolü sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforeziyle yapıldı. Katekol ve 4-metil katekol substratları kullanılarak PFO enziminin optimum pH, optimum sıcaklık, optimum iyonik şiddet, stabil pH, KM ve Vmax değerleri belirlendi. Enzimin iki ayrı substratı için sırasıyla optimum pH'sı 5,0-5,5; optimum sıcaklığı 10°C; optimum iyonik şiddeti 0,05 M; stabil pH'sı 5,5, KM değeri 6,17-4,16 mM, Vmax değeri 3,38-7,75 µmol/dk olarak belirlendi. İnhibitör çalışmalarında askorbik asit, sodyum azit, tiyoüre, GSH ve DTT çalışıldı. Bu inhibitörler için beş farklı inhibitör konsantrasyonunda IC50 değerleri belirlendi. Lineweaver-Burk grafikleri yardımıyla bu inhibitörler için Ki sabitleri ve inhibisyon türleri belirlendi. Ki sabitleri ve IC50 değerlerine göre en etkili inhibitörün askorbik asit olduğu tespit edildi. Polyphenol oxidase enzyme causes the enzymatic browning in some fruits and vegetables. In this study, the PFO enzyme was purified for the first time using the Sepharose 4B-L-tyrosine-p-aminobenzoic acid affinity column from Tortum apple. The purity of the enzyme was determined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. Optimum pH, optimum temperature, optimum ionic strength, stable pH, KM and Vmax values of PPO enzyme were determined using catechol and 4-metil catechol substrates. The optimum pH and temperature of PPO were determined as 5,0-5.5, 10°C. Optimum ionic strength of this enzyme was found as 0,05 M for both substrates. KM constants and Vmax values of enzyme for the used two substrates were found as 6,17-4,16 mM and 3,38-7,75 µmol/dk, respectively. Ascorbic acid, sodium azide, thiourea, GSH and DTT were studied in inhibitor studies. IC50 values were determined in five different inhibitor concentrations for these inhibitors. Ki constant and the types of inhibition of these inhibitors were determined by using Lineweaver-Burk graphics. Ascorbic acid was appointed to be the most effective inhibitor according to the Ki constants and values of IC50.
Collections