NADPH - NADP+ kullanan bazı enzimlerin keçi karaciğerinden saflaştırılması, karakterizasyonu, enzim aktivitesi üzerine bazı ilaçların ve kimyasalların inhibisyon etkilerinin incelenmesi
- Global styles
- Apa
- Bibtex
- Chicago Fullnote
- Help
Abstract
Bu çalışmada keçi karaciğer dokusundan glukoz-6-fosfat dehidrogenaz (G6PD), 6-fosfoglukonat dehidrogenaz (6PGD) ve glutatyon redüktaz (GR) enzimleri 2′,5′-ADP Sepharose 4B afinite kromatografi kullanılarak tek basamakda saflaştırıldı. Enzimlerin saflık dereceleri ve alt birimlerinin molekül kütleleri sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile gösterildi. Alt molekül kütleleleri GR için 61,3 kDa, 6PGD için 51,4 kDa ve G6PD için 63,1 kDa olarak bulundu. Jel Filtrasyon kromatografisi ile doğal hallerinin molekül kütleleri de sırasıyla 125,89 kDa, 100,02 kDa ve 63,09 kDa olarak belirlendi. Kinetik çalışmalar neticesinde, enzimler için optimum pH, iyonik şiddet, stabil pH, optimum sıcaklık ve substratlar için KM ve Vmax değerleri tespit edildi. Bunlara ilaveten, küçük baş hayvanlarda kullanılan Amoksisilin, Ampisilin, Neomisin, Oksitetrasiklin, Penisilin G, Sülfadimidin ve Tilozin gibi bazı ilaçların söz konusu enzim aktiviteleri üzerinde in vitro olarak belirlendi ve Ki değerleri 0,08 ± 0,03; 15,24 ± 2,97 mM aralığında inhibe etkileri hesplandı. Glutathione reductase (GR), 6- phosphogluconate dehydrogenase (6PGD) and glucose 6-phosphate dehydrogenase (G6PD) were purified separately in the single step from goat liver using 2′, 5′-ADP Sepharose 4B affinity chromatography. The purity of the enzymes was showed by SDS–PAGE analysis. The subunit molecular weights was found 61.3 kDa for GR, 51.4 kDa for 6PGD and 63.1 kDa for G6PD by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and.the molecular weights of the enzymes were found as 125.89 , 100.02 and 63.09 kDa by Sephadex G-100 gel filtration chromatography, respectively Kinetic properties of enzymes including, optimum temperature, optimum pH, stable pH, optimum ionic strength, KM and Vmax values were evaluated for each enzyme The enzymes were inhibited by Amoxicillin, Ampicilin, Neomycin, Oxytetracycline, Penicillin G, Sulfadimidine and Tylosin as in vitro with Ki values in the range of 0.08 ± 0.03 ; 15.24 ± 2.97 mM.
Collections