Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sarı ribulokinaz geninin klonlanması, ekspresyonu ve karakterizasyonu
- Global styles
- Apa
- Bibtex
- Chicago Fullnote
- Help
Abstract
Ribulokinazlar (transferazlar, EC 2.7.1.16) L-ribulozu, L-ribuloz 5 fosfata; D-ribulozu, D-ribuloz 5 fosfata dönüşümünü sağlayan enzimlerdir. Bu enzimin katalizlediği reaksiyonlar sonucunda oluşan ürünler, pentoz fosfat yolunda kullanılır.Bu çalışma Anoxybacillus kestanbolensis AC26 sarı ribulokinaz geninin klonlanmasını, gen ürününün izolasyonunu ve karakterizasyonunu konu almaktadır. Yapılan bu çalışmada Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sarı ribulokinazını kodlayan 1695 nt'lik genin baz dizilimi belirlenerek pET-28a(+) vektörüne klonlandı. Geni içeren vektör, E.coli BL21 (DE3) pLysS hücresine aktarılarak ribulokinaz ekspres edildi ve saflaştırıldı. Saf ribulokinaz, 60°C ve pH 9'da optimum aktivite gösterdi. Enzimin, D-ribuloz için Km değeri 0,94 mM olarak belirlendi. Enzimin aktivitesi üzerine Mg+2, Ca+2, Li, K, Zn+2 metal iyonlarının, ß-merkaptoetanol ve EDTA'nın etkileri araştırıldı. Mg+2 ve ß-merkaptoetanol'ün aktiviteyi arttırdığı, Zn+2'in aktiviteyi inhibe ettiği, Ca+2, Li, K, EDTA'nın ise aktiviteyi etkilemediği görüldü. A. kestanbolensis AC26 Sarı ribulokinazının moleküler ağırlığı 61,96 kDa olarak tespit edildi. Ribulokinases (transferase; EC 2.7.1.16) convert L-ribulose to L-ribulose 5 phosphate and D-ribulose to D-ribulose 5 phosphate. The products as a result of reactions catalyzed by this enzyme are used in pentose phosphate pathway.This study describes the cloning of a ribulokinase gene from Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sari, isolation, and characterization of the gene product. A 1695 nt gene coding for ribulokinase from Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sari sequenced and cloned into pET-28a(+) vector. Vector encoding ribulokinase gene was transformed into E.coli BL21 (DE3), expressed and purified. The purified ribulokinase showed optimal activity at 60°C in pH 9. Km value for D-ribulose was determined to be 0.94 mM. Effects of metal ions (Mg2+, Ca2+, Li, K, Zn2+), ß-mercaptoethanol and EDTA on the enzyme activity were studied. Enzyme activity was increased by Mg2+ and ß-mercaptoethanol, and inhibited by Zn2+. In addition, Ca2+, Li, K, and EDTA had no effect on the enzyme activity. Molecular mass of A. kestanbolensis AC26 Sari ribulokinase was determined to be 61.96 kDa.Key words: Anoxybacillus, Ribulokinase, Expression
Collections