Kalp dokusu kaynaklı biyomalzemelerin geliştirilmesi ve hücre kültürlerinde kullanılması

Abstract

Bu çalışmada, sığır kalp dokusu kaynaklı bir biyomalzeme geliştirildi. Çeşitli deselülerizasyon protokolleri uygulanarak DNA içeriği, histokimya ve agaroz jel elektroforez analizleri ile en uygun deselülerizasyon protokolü belirlendi. Elde edilen deselülerize matriks, enzim yardımı ile parçalanarak, enjekte edilebilir miyokardiyal matriks yapısı elde edildi ve bu yapının özellikleri hücre kültüründe incelendi. Miyokardiyal matriks yapının jel oluşturma zamanı türbidimetrik ölçümlerle saptandı. Protein içeriği Lowry yöntemi ve SDS-PAGE analizleri ile belirlendi. In vitro çalışmalar için elde edilen miyokardiyal matriks yapıya insan adipoz mezenkimal kök hücreleri tohumlandı ve yapı üzerindeki hücre canlılığı MTT [3-(4,5-dimetildiyazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolyum bromür] yöntemi ile belirlendi. Belirli zaman noktalarında alınan örnekler histokimyasal olarak incelendi.. Sonuç olarak sığır kalp dokusu etkin bir biçimde hücresizleştirilmiş ve enjekte edilebilir bir formu elde edildi. Elde edilen miyokardiyal matriks yapıda hücrelerin canlılığını devam ettirdiği belirlendi.

In this study, several decellularization protocols were evaluated, in order to develop a biomaterial derived from bovine cardiac tissue. The most suitable decellularization protocol was determined based on DNA content, histochemistry and agarose-gel electrophoresis analysis of the constructs. Decellularized matrix was subjected to enzymatic digestion to obtain an injectable myocardial matrix. The structure was later analysed in tissue culture settings. The gelation time of myocardial matrix was determined by turbidimetric analysis. Protein content was determined using the Lowry and SDS-PAGE methods. For the in vitro studies, myocardial matrix was seeded with human adipose mesenchymal stem cells, and the viability of the seeded cells was determined via MTT [3-(4 5-dimethylthiazol-2-yl)-2 5-diphenyltetrazolium bromide] assay. Samples that were taken on pre-determined time-points were analysed by histochemistry. Results indicated that bovine cardiac tissue was efficiently decellularized and an injectable form was succesfully developed. Decellularized myocardial matrix structure was shown to support cell viability.