MisL ototransporter proteininin salmonella enterica Serovar typhimurium`a karşı geliştirilen immün yanıttaki rolünün belirlenmesi

Abstract

Bu araştırmada S. Typhimurium'da tanımlanan bir ototransporter olan MisL proteininin, yolcu domaini klonlanarak E. coli BL21 suşuna aktarıldı. Klonlanan gen bölgesinin ifadesi Western Blot yöntemi ile tanımlandı. Heterolog konakçıda üretilerek saflaştırılan MisL peptidine karşı geliştirilen antikorlar ile yürütülen hücre kültürü denemelerinde, MisL'in immün yanıtları (IL-6 ve TNF-α) istatistiki açıdan anlamlı bir şekilde teşvik ettiği belirlendi. Nötralizasyon denemelerinde ise; anti-misL antikorunun TNF-α için kısmi nötralizan etki göstermesine rağmen aynı durumun IL-6 için söz konusu olmadığı belirlendi. Biyotin ile işaretli antikorun streptavidin muamele edilmiş hücrelerle ilişkisi ve enzim uygulaması denemeleri, MisL proteininin salgı sürecinde hücreden kesilerek ortama salındığını kanıtlamıştır. Bu durum yeterli nötralizan etkisinin görülememesini açıklamaktadır.

In this study, the passenger domain of the protein MisL which is described as auto-transporter on S. Typhimurium has been cloned and transferred into E. coli BL21 strain. Expression of the cloned gene region was characterized by Western Blot method. Cell culture experiments were carried out with antibodies were developed against the purified MisL peptide produced in a heterologous host and statistically, it was determined that MisL promoted immüne responses (IL-6 and TNF-α) as meaningful. Neutralization assays showed that although the anti-misL illustrated a partial neutral effect for TNF- α, the same situation was not valid for IL-6. The relationship between antibodies marked with biotin and cells treated with streptavidin besides enzyme application trials proved that MisL released into the environment by cutting from the cell in the secretory process of proteins. This situation explains the failure to observe the impact of adequate neutralizing.