Kompozit doku allotransplantasyonu yapılan sıçanlarda, yağ doku kaynaklı mezenekimal kök hücrelerin ilk 24 saatte meydana gelen sistemik yanıta etkisi

Abstract

AMAÇ: Kompozit doku nakilleri eş zamanlı birçok farklı doku türününrekonstrüksiyonu açısından avantajlıdır. Ancak bu işlemin önündeki en büyük soruntüm doku çeşitlerine karşı ayrı ayrı oluşan sistemik ve immün yanıttır. Biz buçalışmamızda kompozit doku nakillerine bağlı ilk 24 saatte meydana gelen sistemikyanıtı ve oluşan sistemik yanıta yağ doku kaynaklı mezenkimal kök hücrenin (MKH)etkisini gözlemlemeyi amaçladık.YÖNTEM: Çalışmada 29 adet Wistar Albino (WA) , 29 adet Sprague Dawley (SD)türü sıçan kullanılmıştır. 24 adet WA sıçan 12'şerli 2 ayrı gruba ayrılmıştır. ( Grup I,Grup III), 24 adet SD sıçan 12'şerli 2 ayrı gruba ayrılmıştır. ( Grup II, Grup IV) . Kalan5 adet WA ve 5 adet SD türü sıçan MKH eldesi ve bazal karaciğer apoptoz değerlerininölçülmesinde kullanılmıştır. Bu gruplardan elde edilen MKH süspansiyonları kenditürlerinden sıçanlara enjekte edilmek üzere -80 ºC de saklanmış ve enjeksiyondan 40dakika önce uygun koşullarda eritilmiştir. Grup I ile Grup II arasında, Grup III ileGrup IV arasında çapraz sol arka ekstremite transferi planlanmıştır. Transfer öncesitüm sıçanlardan kuyruk kanı alınarak bazal AST, ALT, Üre ve Kreatinin değerleriölçülmüştür. Transfer esnasında anastomoz açılıp ekstremite dolaşımı gözlenen GrupIII ve Grup IV sıçanlara kendi t ürlerinden elde edilen adipoz kaynaklı MKH içerensüspansiyon intraperitoneal olarak enjekte edilmiştir. Grup I ve Grup II sıçanlara aynımiktar serum fizyolojik intraperitoneal olarak enjekte edilmiştir. Transfer işleminden24 saat sonra bacak dolaşımı yeterli olan sıçanlar sakrifiye edilerek hem kan hemdekaraciğer doku örneği alınmıştır. Elde edilen veriler hem grup içinde hemde gruplararasında istatistiksel olarak analiz edilmiştir.BULGULAR: İskemi süreleri ile 24 saat sonunda kandan ölçülen AST, ALT, Üre,Kreatinin değerleri ve karaciğer dokusundan akım sitometrisi ile elde edilen ölü hücre,canlı hücre, erken ve geç apoptotik hücre oranları arasında korelasyon olmadığıgörülmüştür. Kompozit doku nakli sonrası tüm gruplarda AST değerlerinde artışolmasına rağmen bu artış sadece 1 grupta anlamlı bulunmuştur. Kreatinin ve ALTdeğerlerinde tüm gruplarda anlamlı oranda azalma gözlenmiştir. Üre değerleri MKHenjeksiyonu yapılmayan gruplarda azaldığı halde enjeksiyon yapılan gruplarda artmışolarak gözlendi. Akım sitometrisi incelemesinde MKH enjeksiyonu yapılan gruplardacanlı hücre, erken ve geç apoptotik hücre oranları arasında fark gözlenmedi. Sadece 1grupta MKH enjeksiyonu sonrası ölü hücre oranında azalma olduğu gözlendi. MKHeldesi için kullanılan sıçanlardan alınan karaciğer örneklerinin akım sitometrikincelemesi sonuçları, cerrahi işlem yapılıp MKH enjeksiyonu yapılmayan ve 24 saatsonunda sakrifiye edilerek karaciğer örnekleri alınan sıçanlar ile karşılaştırıldığındaölü hücre, canlı hücre, erken ve geç apoptotik hücre oranları açısından anlamlı farkgözlenmemiştir.SONUÇ: Kompozit doku nakilleri sonrası ilk 24 saatte meydana gelen sistemikyanıtın izlenmesinde AST, ALT, Üre ve Kreatinin değerlerinin anlamlı bulguvermediği, iskemi süresinin karaciğer ve böbrek fonksiyon testleri ile korelasyongöstermediği, AST ve ALT değerlerinin karaciğerde mevcut apoptoz ve ölü hücremiktarı ile korelasyon göstermediği bu nedenle takip açısından yeterli olmadığı,MKH' lerin kompozit doku nakli yapılan sıçanlarda ilk 24 saatte meydana gelensistemik yanıta belirgin olumlu etkisinin olmadığı hatta bazı parametrelerde olumsuzetki oluşturabileceği sonucuna varılmıştır.Anahtar kelimler: Yağ doku, kök hücre, kompozit doku nakli, sistemik yanıt

OBJECTIVE: Composit tissue transplantations are advantageous for reconstructionsof many tissue. However the biggest problem of this process is the sistemic andimmune response against all tissue types seperately. In our study we aimed to observesistemic response in the first 24 hours due to vascularised composit tissueallotransplantations (VCA) and the effect of adipose derived mesenchimal stem cellto the systemic response.METHOD: 29 Wistar Albino and 29 Sprague Dawley rats were used in the study.Twentyfour WA rats were seperated to 2 groups with 12 rats.(group 1,3) 24 SD ratswere seperated to 2 groups with 12 rats (group 2,4) Remaining 5 WA and 5 SD ratswere used for obtaining Mesenchimal Stem Cell (MSC) and for measure the basal liverapoptosis values. These MSC suspensions were preserved in -80 degrees in order toinject the same species and melted 40 minutes before the injection in favourableconditions. Between group 1 and 2 and between group 3 and 4 the cross left hindextremity transfer was planned. Before transfer, all rats' basal AST, ALT, BUN,Creatinin values were measured by taking the tail blood. The suspension including theadipose derived MSC which is obtained from the same species, was injectedintraperitoneally to group 3 and 4 rats that had been observed the extremity circulationby opening the anastomosis during the transfer. Same amount of serum physiologicwas injected intraperitoneally to the group 1 and 2. Twentyfour hours after thetransfer, the rats which had the enough leg circulation were sacrificed and both bloodand liver tissue samples were obtained. The obtained results were statistically analysedboth in the group and between the groups.RESULTS: We didn't find any correlation between ischemia time and AST, ALT,BUN and Creatinin values which were measured 24 hours after VCA. Alike anycorrelation with flow cytometry results. Despite the increase in AST values aftercomposite tissue transplantation, this increase was significant in only one group.Creatinin and ALT values were significantly decreased in all groups. BUN values weredecreased in the groups which wasn't injected MSC, however it is observed asincreased in the groups which was injected MSC. Significant difference wasn'tobserved between the dead cell, live cell, early and late apoptotic cell in the groupsthat was injected MSC in the flow cytometry. Only in one group, it is observed thatthe dead cell quantitiy was decreased after the MSC injection. The flow cytometricresults of liver samples of the rats which was utilized for obtaining the MSC weren'tdiffers from the rats which were operated but not get the MSC injection and sacrificedafter 24 hours from the point of dead cell, live cell, early and late apoptotic cell.CONCLUSION: It is concluded that AST, ALT, BUN and Creatinin values aren'tgive significant result for monitoring the systemic response in the first 24 hours afterthe composite tissue transplantations. Ischemia time doesn't corelate with liver andkidney function tests; AST and ALT values don't corelate with the amount of liverapoptosis and dead cell and so not enough for monitoring; MSC has no significantlypositive effect on the systemic response in the first 24 hours of the composite tissuetransplantation, even has negative effects on some parameters.Key words: Adipose tissue, stem cell, composite tissue allotransplantation, systemicresponse