Glikozillenmiş hemoglobin (HbAlc) tayininde kolon kromatografisi ve immunuoassay metodlarının değerlendirilmesi

Abstract

ÖZET Diyabetli hastalarda glikohemoglobin tayinleri tayinden önceki 6-8 haftalık ortalama kan glukoz konsantrasyonunu belirlemek için yaygın bir şekilde kullanılmaktadır. Bu çalışmada HbAıc (total glikohemoglobinin yaklaşık % 80' i) miktarını belirlemede iki metod kullanıldı. (1) Katyon deği şimi kromatograf isi (Mikrokolon Kromatograf isi ), (2) îmmuno- aglütinasyon inhibisyonu (DCA 2000 HbAıc analizörü ile). Bu ikinci metodda aglütinatör, HbAıc'ye spesifik monoklonal antikorla kaplı lateks'in aglütinasyonuna sebep olur. Total kan örneklerindeki HbAıc, sınırlı sayıdaki antikor-lateks bağlama bölgeleri ile yarışarak aglütinasyonun inhibisyonuna yol açar. %HbAıc düzeyleri 36 kişide immunoas-say metodunda 6.3±2.17 (aritmetik ortalama ± standart sapma) ve kolon kro matograf isinde 7.2±2.53 olarak bulundu. îki metod arasında önemli bir korelasyon (r=0.938) tesbit edildi. Referans sı nırlar (± 2 standart sapma) 23 sağlıklı kişide immunoassay metodunda % 4.5-5.7 ve kolon kromatograf isinde % 4.7-6.7 olarak hesaplandı. Hassasiyetlerine göre iki metodun karşı laştırılması immunoassay metodunun kromatograf i metodundan daha hassas olduğunu gösterdi (Tayin içi CV ler immunoassay metodunda normal düzeyde % 1.87, yüksek düzeyde % 1.46 iken, kromatograf içinde normal düzeyde % 5.60, yüksek düzeyde % 8.44 idi. ). Bu yeni immunoaglütinasyon inhibisyon metodolojisinin basitliği, hassasiyeti ve kısa tayin süresi (yaklaşık 9 dak. /numune) yönleriyle kromatograf ik metodların yerini alabileceği sonucuna varıldı.

EVALÜATON OF COLON CHROMATOGRAPHY and IMMUNOASSAY METHODS IN GLYCOHEMOGLOBIN (HbAlc) DETERMINATION SUMMARY Assays of glycohemog lobin are widely used to assess the time-averaged blood glucose concentration over the preceding 6-8 weeks in diabetic patients. The methods used to quantify HbAic (approximately 80 % of total glycohemog lobin) in this study include cation - exchange chromatography (microcolon chromatography) (1) and immunoaglut inat ion inhibition (2) detected by DCA 2000 HbAic analyzer. In the latter method, an agglutinator causes agglutination of latex coated with HbAic specific monoclonal antibody. HbAic in whole blood specimens competes for the limited number of antibody-latex binding sites causing an inhibition of agglutination and a decreased scattering of light. HbAic % levels were found to be 6.3+2.17 (the arithmetic mean ± standart deviation) in immunoassay method and 7.2+2.53 in colon chromatography in 36 subjects with or without diabetes mellitus. A significant correlation (r=0.938) was found between two methods. The reference ranges (±2 standart deviation) were calculated as 4.5-5.7 % in immunoassay method and 4.7-6.7 % in colon chromatography in 23 volunteer healthy subjects. Comparison of two methods according to their precisions showed that immunoassay method was more precise than chromatography method (within run CVs 1.87 in normal level, 1.46 in high level). It was concluded that the new immunoaglutination inhibition methodology may take chromatographic methods place because of its simplicity, accuracy, and short determination time (about 9 min per sample).