Türk propolisinin meme kanseri (MCF-7) hücre serisi üzerinde mikrorna ekspresyonu ve apoptoza etkilerinin incelenmesi

Abstract

Kanser genetik ve gelişimsel bir süreçle ortaya çıkan, hücrelerin aşırı proliferasyonu ve apoptoz fonksiyonlarını kaybederek oluşan patolojik bir durumdur. İlaçların yan etkilerinin ortaya çıkması, insanları ilaç olarak bilinen doğal ürünlerin tüketilmesine yöneltmiştir. En çok kullanılan ürünlerden biri de arı ürünü olan propolis'tir. Literatürde propolisin antikanser ve antiproliferatif etkilerine yoğunlaşan çok sayıda çalışmanın mevcut olduğu görülmektedir. Ancak Türk propolisinin kanser hücre serilerindeki sitotoksik etkinliğini konu alan çalışmaların sınırlı olduğu ve miRNA seviyelerindeki değişimlerine ait meme kanseri hücre serilerinde herhangi bir in vitro çalışma yapılmadığı görülmektedir. Bu çalışmada; Türk propolisinin meme kanseri hücre serilerindeki miRNA seviyeleri üzerine etkisi, hücre proliferasyonu ve apoptoz ile ilişkisinin incelenmesi amaçlandı. Etanollü propolis ekstraktının antioksidan kapasitesi toplam fenolik içerik, toplam flavonoid içerik analizleriyle, sitotoksik etkinliği ise MTT metoduyla belirlendi. Propolis ekstraktının MCF-7 hücreleri üzerindeki sitotoksik etki mekanizması; apoptoz, hücre döngüsü yönünden flow sitometrik ve western blot yöntemleri ile incelendi. miRNA seviyeleri ise RT-qPCR yöntemiyle belirlendi.Çalışmamızda propolis ekstraktının toplam polifenolik ve flavonoid içerikleri gram propolis başına sırasıyla; 122.5 mg gallik asit, 50.9 mg kuersetin eşdeğeri olarak bulundu. Ekstraktın MCF-7 hücre serisi üzerindeki sitotoksik etkisinin normal fibroblast hücrelerine göre seçici olduğu saptandı. Ekstraktın MCF-7 hücrelerini hücre döngüsünün G1 evresinde durdurduğu; p53 protein seviyesinin artmasına bağlı olarak p21 ve Bax protein düzeylerini, apoptozu ve supresör miRNA'ların seviyelerini arttırarak sitotoksik özellik gösterdiği belirlendi.

Cancer is a pathological state that is an occurring with genetic and developmental process due to the excessive proliferation of the cells and loss of their apoptosis functions. The emergence of the side effects of the drugs has led people to the consumption of natural products known as medicine. One of the most widely used products is propolis, which is a bee product.There have been many studies about anticancer and antiproliferative effects of propolis in the literature. Even now, there are limited studies about cytotoxic effects of Turkish propolis on cancer cell lines and no in vitro studies are performed on the breast cancer cell lines related to changes of miRNA levels. Present study it has been aimed to examination of the effects Turkish propolis on miRNA levels of breast cancer cells line, and its relationship with cell proliferation and apoptosis.Antioxidant capacity of ethanolic propolis extract was determined by total phenolic and flavonoid contents analysis and cytotoxic activity of ethanolic propolis extract was evaluated using MTT assay. Mechanisms involved in the cytotoxic action of Turkish propolis on MCF-7 cells were investigated with regard to apoptosis and cell cycle using flow cytometry and western blot. miRNA levels were detected by RT-qPCR method.In our study the values of total polyphenolic and total flavonoid contents were found 122.2 mg gallic acid and 50 mg quercetin equivalents per gram propolis, respectively. Propolis extract exhibited selective toxicity against MCF-7 cells compared to normal fibroblast cells. We determined that ethanolic extract of propolis demonstrated cytotoxic activity by inducing G1 cell cycle arrest of MCF-7 cells, increasing p21 and Bax protein levels, apoptosis and tumor suppressor miRNA levels by increasing the levels of p53 proteins.