Bacillus clausii GMBAE 42`den saflaştırılan alkalen proteazın termal inaktivasyon kinetiğinin belirlenmesi ve Cu2+ iyonları varlığında termostabilizasyonu

Abstract

?Bacillus clausii GMBAE 42'den SAFLAŞTIRILAN ALKALEN PROTEAZINTERMAL İNAKTİVASYON KİNETİĞİNİN BELİRLENMESİ ve Cu2+ İYONLARI ileTERMOSTABİLİZASYONU??Nurçin ÇELİK?Anahtar Kelimeler: Bacillus clausii, Alkalen proteaz, İnaktivasyon kinetikleriÖzet: Bu çalışmada, Bacillus clausii GMBAE 42 serin alkalen proteazının termalinaktivasyonu üzerine Cu2+ iyonlarının koruyucu etkisi incelenmiştir. Enzime pH 10.5'da50ºC'de 1-10 mM konsantrasyonlarda CuCl2 ilavesinde, optimum konsantrasyon 5 mMolarak bulunmuştur. Doğal enzimin ve 5 mM CuCl2 içeren enzimin, inaktivasyonmekanizmalarının pH 10.5'da 45-65ºC aralığında ön inkübasyonlar sırasında birincidereceden inaktivasyon kinetiklerine uyduğu gözlenmiştir. 5 mM CuCl2 içeren enzimininaktivasyon hız sabitleri (ki) doğal enzimden daha düşük ve yarı ömür zamanları (t1/2) doğalenzimden daha yüksek bulunmuştur. 5 mM CuCl2 içeren enzimin inaktivasyonununaktivasyon serbest enerji (âGi) değerleri çalışılan tüm sıcaklık değerlerinde doğalenziminkinden daha yüksek olduğu belirlenmiştir. 5 mM CuCl2 içeren enzimin en yüksekkararlılığı pH 10.5'da 50ºC'de 2.42 kat olarak gözlenmiştir. 5 mM CuCl2 ilavesinden sonraelde edilen enzimin daha düşük Km ve daha yüksek kcat değerleri, enzimin katalitikperformansı ve substrat afinitesi üzerine Cu2+ iyonlarının artırıcı etkisini göstermektedir.

?DETERMINATION OF INACTIVATION KINETICS OF ALKALINE PROTEASEPURIFIED FROM Bacillus clausii GMBAE 42 and ITS THERMOSTABILIZATIONby Cu2+ IONS??Nurçin ÇELİK?Keywords: Bacillus clausii, Alkaline protease, Inactivation kineticsAbstract: An investigation was carried out to evaluate the protective effect of Cu+2 ions onthe thermal inactivation of an Bacillus clausii GMBAE 42 serine alkaline protease. Optimalconcentration was found to be 5 mM after addition of CuCl2 into enzyme solution at 1-10 mMconcentrations. The inactivation mechanism of both native and containing 5 mM CuCl2enzyme appeared to obey first order inactivation kinetics during prolonged incubations at 45-65ºC range and pH 10.5. Inactivation rate constants (ki) of containing 5 mM CuCl2 enzymewere always lower, and half-life times (t1/2) were always higher than that of native enzyme.The activation free energy of inactivation (âGi values) of 5 mM CuCl2 containing enzymewere found to be always higher than that of native enzyme at all temperature values studied.Highest stability of 5 mM CuCl2 containing enzyme was observed as 2.42 fold at 50ºC andpH 10.5. Lower Km and higher kcat values of enzyme obtained after addition of 5 mM CuCl2indicates the improved effect of Cu2+ ions on the substrate affinity and catalytic performanceof the enzyme.