Tüylü hücreli lösemili hastalarda C- kit geninin immunohistokimyasal ve genetik araştırılması

Abstract

Sunulan çalışmada, birçok kanser tipinde doğrudan etkisi olduğu bilinen C-Kit geninin Tüylü Hücreli Lösemi (Hairy Cell Leukemia) olgularındaki mutasyon varlığının araştırılması amaçlanmıştır. C-kit, 145 kDa ağırlığında, insanda ki lokalizasyonu 4. kromozomun uzun kolunda olan ve transmembran Tirozin Kinaz Reseptörü (RTK) CD117'yi kodlayan bir proto-onkogendir.Patolojik olarak HCL tanısı konulmuş olan 18 hastanın parafin bloklar içerisinde temin edilen kemik iliği doku örneklerinden DNA izolasyonu yapılmıştır. İzole edilen DNA'lardan c-kit proteinini kodlayan ekzon 9, 11, 13 ve 17 içerisinden ekzon 11 ve ekzon 13 bölgeleri PCR ile çoğaltılmıştır. Çoğaltılan DNA'lardan DNA dizi analizi (sekans analizi) gerçekleştirilmiştir. Analiz sonucu 18 örneğin sadece 1'inde ve yalnızca ekzon 11'de sense mutasyonu görülmüştür. 559 nolu amino asit bölgesinde nükleotid dizisinde Timin/Adenin değişimi sonucu GTT yerine GTA kodonu oluşmuştur; ancak sentezlenen aminoasit yine Valin'dir. Örneklerin hiçbirisinde ekzon 13'te herhangi bir mutasyona rastlanmamıştır. Doku kesitleri üzerinde yapılan immunohistokimyasal CD117 boyaması sonucunda hiçbir hastada C-kit protein ekspresyon artışına rastlanmamıştır.Anahtar sözcükler: Tüylü Hücreli Lösemi, C-kit, CD117, PCR, İmmunohistokimya

This thesis was to investigate the existence of mutation in C-Kit genome, which is known to cause many cancer types, including Hairy Cell Leukemia (HCL) cases. C-Kit is a proto-oncogene responsible for coding transmembrane tyrosine kinase receptor (RTK). It?s located at the long arm of human 4. chromosome and weighs 145 kDa.DNA was isolated from bone marrow samples in paraffin which were taken from 18 patients diagnosed with HCL. Using PCR, exon 11 and exon 13 regions among exon 9, 11, 13, and 17 were reproduced from the isolated DNA?s. These exons are responsible for coding c-kit protein. Sequence analysis was done for the reproduced DNA. Only one of the 18 samples had the mutation and it was found only on exon 11. This mutation was on amino acid 559 and it was a nucleotide sequence change. Even though the mutation was a thymidine / adenosine replacement and instead of GTT, the sequence was GTA, the amino acid synthesized was still Valine. None of the samples had a mutation on exon 13. After immunohistochemical CD117 staining the tissue cross-sections, none of the patients showed an increase on c-kit protein expression.Key words: Hairy Cell Leukemia, C-kit, CD117, PCR, Immunohistochemistry