Direnç mutasyonları gösteren HBV mutantlarının belirlenmesi ve bu mutantların çeşitli antivirallere karşı direnç profillerinin in vitro fenotipleme yöntemi ile karakterizasyonu

Abstract

Dünya populasyonunun üçte biri hepatit B virüsüne maruz kalmıştır. HBV infeksiyonu tüm dünyada ve Türkiye'de epidemiyolojik bir problemdir. İlaç direncinin gelişimi antivirallerin uzun vadeli etkinliğini önemli ölçüde sınırlamaktadır. Sıklıkla oluşan ilaca dirençli hepatit B virüsü mutantları, tedavi başarısızlığına ve karaciğer hastalığında ilerlemeye sebep olur.Çalışmamızda kliniğe başvurmuş serumlarında HBV virüsü tespit edilmiş hastaların, hepatit B virüsü polimeraz gen bölgesinin dizi analizi yapıldı ve mutasyon çeşitlerine göre listelendi. Hasta serumlarından elde edilen HBV DNA, HBV tüm genom olacak şekilde çoğaltıldı ve bir TA vektörüne klonlandı. Elde edilen klonların viral polimeraz bölgesindeki mutasyonlar DNA dizi analizi yöntemiyle tanımlandı. Bulunan mutasyonların ilaç direnç profilleri hücre kültüründe in vitro fenotipleme deneyleriyle belirlendi. In vitro fenotipleme deneyi ile elde edilen klonlardaki test edilecek mutasyonları taşıyan HBV genomlarının Huh7 hücre kültürlerinde ekspresyonları yapıldı. Bu HBV varyantlarına karşı değişik antivirallerin ekspresyonu baskılama aktiviteleri test edildi ve tespit edilen mutasyon paternlerinin antiviral direnç profilleri ortaya çıkarıldı.

One third of the world?s population has been exposed to hepatitis B virus (HBV). HBV infection is an epidemiological problem throughout the world, including Turkey. Development of drug resistance is a major limitation to the effectiveness of antivirals Drug resistant hepatitis B virus mutants frequently arise, leading to treatment failure and progression to liver disease.In this study, sequencing analysis of the polymerase gene region of HBV extracted from serum samples of the patients who had been admitted to our clinics has been done. HBV DNA extracted from serum samples of the patients has been amplified as HBV full genome and cloned into a TA vector. Mutations in the HBV polymerase region of the clones have been identified by DNA sequencing method. Resistance profiles of the identified mutations have been clarified in cell culture using in vitro phenotyping assay. Expression of HBV genomes bearing mutations to be tested in in vitro phenotyping assays have been done in Huh7 cell cultures. The suppression activity of different antivirals on these HBV variants has been tested and antiviral resistance profile of these mutation patterns has been clarified.