Rekombinant insan insulin peptidinin bakteriyal ekspresyon sistemi kullanarak üretimi

Abstract

İnsülin pankreasta yer alan beta hücreleri tarafından üretilen, polipeptid yapıda olup 5400 dalton moleküler ağırlığına sahip, 51 aminoasite sahip, A ve B zincirleri olarak bu zincirlerin birbirine disülfit bağlarıyla bağlanması sonucu oluşan bir hormondur. Bu hormon insan vücudunda kan şekerinin ayarlanmasında rol oynamaktadır. İnsan vücudunda kan şekeri dengesinin bozulması halinde diyabet hastalığı ortaya çıkmaktadır. Bu hastalık dünya birçok insan da Tip 1 diyabet, Tip 2 diyabet, Gebelikte diyabet ve Spesifik nedenlere bağlı diyabet olarak görülmektedir. Bu tez çalışmasında rekombinant DNA teknolojisi, terapötik kullanım için insan insülinin üretimi bakteri üretici sistemleri kullanılarak üretilmesi hedeflenmiştir. Bu nedenle insülin geninin tüm sekansını kodlayan vektorler oluşturulmuştur. Oluşturulan bu vektörler bakteri ürettici sistemde kullanılmak üzere Escherichia coli K12-JM109 ve BL21 (DE3) hücrelerine aktarılıp ilgili proteinin üretilmesi sağlanmıştır.Ardından yapılan detaylı çalışmalarla protein üretimi ve saflaştırma optimize edilmiştir.

Insulin which is produced by pancreas with situated beta cells, has polypeptide structure. Insulin has 5400 daltons with a molecular weight and fifty one amino acids. Moreover the insulin hormone is the result of connected to each other by disulfide bonds of the A chains and B chains. This hormone plays a role in the regulation of blood sugar in human body. When the deterioration of the balance of blood glucose arises in the human body, it causes diabetes. This disease is seen among many people in the world, which is named such as Type 1 diabetes, Type 2 diabetes, gestational diabetes, and diabetes by specific causes.In this thesis the main goal is produced using bacterial production of human insulin producers systems for therapeutic, use recombinant DNA technology. Therefore, they are vectors encoding the entire sequence of the insulin gene have been created. The generated vectors used for the production bacteria system, transferred to the Escherichia coli, K12-JM109 and BL21 (DE3) cells and they are used for protein production. After that the protein production and purification have been optimized with the detailed study.