İnsan umbilikal venlerinden elde edilen endotel hücre (HUVEC) kültüründe, vasküler endoteliyal büyüme faktörünün (VEGF) vasküler hücre adezyon molekülü-1(VCAM-1) ve intersellular adezyon molekülü-1 (ICAM-1)ekspresyonu üzerine etkilerinin incelenmesi

Abstract

ÖZET İnsan Umbilikal Venlerinden Elde Edilen Endotel Hücre (HUVEC) Kültüründe, Vasküler Endoteliyal Büyüme Faktörünün (VEGF), Vasküler Hücre Adezyon Molekülü-l (VCAM-1) ve İntersellüler Adezyon Molekülü-l (ICAM-1) Ekspresyonu Üzerine Etkilerinin İncelenmesi İnsan umbilikal veni endotel hücresi iyi bilinmektedir. Vasküler Endoteliyal Büyüme Faktörü (Vascular Endothelial Growth Factor; VEGF) endotel hücresinin çoğalmasını ve bazı adezyon moleküllerinin sentezlemesini sağlamaktadır. Adezyon moleküllerinden İntersellüler Adezyon Molekülü-l (Intercellular Adhesion Molecules- 1; ICAM-1) ve Vasküler Hücre Adezyon Molekülü-l (Vascular Cell Adhesion Molecules- 1; VCAM-1), kan hücrelerinden bir kısmının inflamasyon sırasında damar dışına çıkmasına yardım etmektedir. Bu çalışmadaki amacımız, in vitro koşullarda, başka hiç bir hücresel ve humoral uyaran olmadan, sadece VEGF'ün endotel hücrelerinin sentezledikleri VCAM-1 ve ICAM-1 ekspresyonu üzerine etkisini görmektir. Bu amaçla, umbilikal venden elde edilen endotel hücreleri kültüre edildi. 5. pasajdan sonra endotel hücreleri %2 serumlu M- 199 medyumu ile 24 saat inkübe edildi. Deney grubuna, 8 saat süresince 10 ng/mL VEGF verildi. Kontrol grubu ise %2 serum ile 8 saat daha inkübe edildiler. Sonra bu hücreler %4 paraformaldehitle tesbit edildi. Fiksasyomı takiben, ICAM-1 ve VCAM-1 antikorları kullanılarak immünositokimya protokolü uygulandı. Deney ve kontrol gruplarında pozitif ve negatif boyanan hücreler sayıldı. VEGF verilen grupta, ICAM-1 ve VCAM-1 sentezinin arttığı görüldü ve bu artışın anlamlı olduğu Ki-Kare testi ile gösterildi. Sonuçlarımız gösterdi ki; VEGF, HUVEC kültüründe, ICAM-1 ve VCAM-1 'in sentezini tek basma arttıran önemli bir faktördür. Anahtar Kelimeler: VEGF, İmmünositokimya, ICAM-1, VCAM-1, Adezyon Molekülleri, HUVEC iv

ABSTRACT Investigation of the Effects of Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) on the Expression of Vascular Cell Adhesion Molecule-1 (VCAM-1) and Intercellular Adhesion Molecule-1 (ICAM-1) in Human Umbilical Vein Endothelial Cell Culture The human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) is well described. Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) plays an important role in endothelial cell proliferation and synthesis of the some cell adhesion molecules. Intercellular Adhesion Molecule-1 (ICAM-1) and Vascular Cell Adhesion Molecule-1 (VCAM-1) provides extravascular migration in some of the blood cells during inflammation. In this study, we investigated the effects of VEGF on VCAM-1 and ICAM-1 expression of the endothelial cells without any other cellular or humoral factors that may be effective in vitro. Umbilical vein-derived endothelial cells were cultured. Following the 5th passage, endothelial cells were incubated in M- 199 medium supplemented with 2% serum for 24 hours. The group of study was incubated in M- 199 medium supplemented with 2% serum containing 10 ng/mL VEGF for 8 hours. The control group was cultured only in M-199 medium supplemented with 2% serum for 8 hours. The cells were fixed with 4% paraformaldehite. Following fixation, immunocytochemistry was applied using monoclonal antibodies to ICAM-1 and VCAM-1. Positive and negative immunostained cells were counted. The expressions of ICAM-1 and VCAM-1 were increased in VEGF group. Using Chi-Square analysis the increase was statistically significant. Overall, we have demostrated that, VEGF is an important factor that stimulates the synthesis of ICAM-1 and VCAM-1 in the cultured HUVECs. KeyWords: VEGF, Immunocytochemistry, ICAM-1, VCAM-1, Adhesion Molecules, HUVEC