Aldehit grubu fiksatiflerin fiksasyon potansiyelinin immünflüoresan teknik ile süper çözünürlük mikroskobunda değerlendirilmesi

Abstract

Fiksasyon, hücre ve doku ile ilgili yapılan çalışmalar için ön basamaktır. Çalışılacakörneğin yapısına uygun fiksatifin seçilmesi bu işlemi etkin kılacak bir özelliktir.İmmünhistokimyasal çalışmalarda en çok kullanılan fiksatifler Paraformaldehit veFormaldehit olmakla birlikte son yıllarda fiksatiflerle ilgili yapılan çalışmalara kullanımınadir ve eski olan Gliyoksal eklenmiştir. Bu fiksatiflerin hücre ya da dokulara uyumluçalışmasını ortamın hidrojen iyonu konsantrasyonu ve ısısı, fiksatifin konsantrasyonu,osmolaritesi ve doku ya da hücre penetrasyonu etkilemektedir.Çalışmamızda ticari olarak satın alınan GMP kalitesindeki insan göbek kordonu stromasıkaynaklı kök hücreler kullanmış ve PFA, FA ve Gly ve bir iyonik olmayan deterjan TritonX-100'ün farklı kokteylleri halinde hazırlanarak fikse edilmiş ve hücrelerin belli yerlerindelokalize olan proteinler işaretlenerek fiksatiflerin fiksasyon potansiyeli, boyanma deseni vesinyal şiddeti ölçümlerine göre lazer taramalı süper çözünürlük konfokal mikroskobundagözlemlere dayalı kalitatif ve kantitatif olarak değerlendirilmiştir. Sonuç olarak, Glygruplarında arka plan ve spesifik olmayan boyanmalar gözlenmiş ve FA gruplarındaGly'ye göre daha iyi bir boyanma deseni ve güçlü bir sinyal oluşumu belirgindir. Budurumda Gly fiksasyonunun PFA veya FA'ya göre üstün yönleri olmadığı ve FA hücrefiksasyonu sırasında kullanılabilir bir fiksatif olabileceği saptanmıştır

Fixation is the preliminary step for cell and tissue studies. Selecting the fixativeappropriate to the structure of the sample to be studied is a feature that will make thisprocess effective. Although most commonly used fixatives in immunohistochemicalstudies are Paraformaldehyde and Formaldehyde, Glioxal, which is rare and old in use, hasbeen added to the studies on fixatives in recent years. Hydrogen ion concentration andtemperature of the medium, fixative concentration, osmolarity, and tissue or cellpenetration are influenced by the compatibility of these fixatives with cells or tissues.In our study, we used commercially purchased GMP quality human umbilical cord stromalderived stem cells and prepared cocktails in different applications of PFA, FA and Gly anda non-ionic detergent Triton X-100. fixation potential, staining pattern in cell morphologyand signal strength measurements were evaluated qualitatively and quantitatively based onobservations on laser scanning super resolution confocal microscopy. In FA groups, abetter staining pattern and a stronger signal formation are evident than in Gly. In this case,Gly fixation was not superior to PFA or FA and it could be used as a fixative during FAcell fixation.