Şeker hastalığının (Diabetes mellitus tip 1) kontrollü ovaryum stimülasyon uygulanmış fare oosit ve embriyolarının üzerindeki etkilerinin incelenmesi

Abstract

Bu çalışmada kontrollü ovaryen stimülasyon ugulanmış farelerde streptozotosin uygulamasıyla elde edilmiş tip 1 diyabetin oosit ve embriyo kalitesi üzerine etkilerini araştırdık . Bu çalışmada, 2 aylık en az iki kez düzenli östrus siklusu geçiren cd I ırkı dişi ve erkek tip fare kullandık. Bunlar; Kontrol grubu ( intraperitonal sitrat verilen grup), sadece streptozotosin uygulanmış grup ( intraperitonal uygulama), stimülasyon grubu (intraperitonal PMSG uygulamasından 48 saat sonra ß hCG uygulaması yapılan grup), streptozotosin ve PMSG grubu ( streptozotosin uygulaması sonucu kan glukoz bakılıp, PMSG uygulamasından 48 saat sonra ß hCG uygulaması yapılmış grup) olmak üzere dört gruba ayrıldı. Streptozotosin uygulaması yapılan fare gruplarında, intraperitonal streptozotosin uygulamasından dört gün sonra kuyruk veninden kan alınarak glukometre ile kan glukoz değerlerine bakıldı. Gruplar üreme sistemlerinde streptozotosinden meydana gelen tip I diyabetin etkilerinin görülmesi için bir ay bekletildi. Kontrollü overyan stimülasyonu uygulanacak grup PMSG enjeksiyonu yapılıp 48 saat sonra ß hCG uygulaması yapıldı ve 12-13,5 saat sonra sakrifiye edildiler. Normal siklus takibi yapılan grupta her gün aynı saatte vajinal smear alınarak östrus siklus takibi yapıldı ve sakrifiye edildi. Kontrol grubundaki farelerde ise her gün aynı saatte vajinal smear alınarak östrus siklus takibi yapıldı ve sakrifiye edildi. Kontrollü ovaryen stimülasyonu yapılan grup PMSG enjeksiyonundan 48 saat sonra ß hCG uygulaması yapıldı ve yaklaşık 12-13.5 saat sonra sakrifiye edilerek oositler toplandı.Dişi fareler sakrifiye edilerek ovidukt ve ovaryumları alındı. Ampulla ve overyan olarak oositleri toplandı. Aynı gün erkek fareleri sakrifiye edip duktus epididimislerden sperm toplandı. Oositler kümülüs ooforus hücrelerinden ayrıldı. Kümülüs ooforus hücrelerinden ayırdığımız oositler morfolojik olarak kalite kriterlerine göre değerlendirildi. Elde edilen sperm ve oositlerle fertilizasyon için IVF yapıldı. IVF uygulamasından 16 ? 18 saat sonra fertilizasyon değerlendirilmesini yapıldı. Oluşan embriyoların blastosist aşamasına kadar takibi yapılarak morfolojik olarak kalite yönünden değerlendirildi daha sonra grupları birbirleriyle kıyaslanarak, bulguları değerlendirildi.Bu çalışmanın sonucunda; görsel ve istatiksel olarak diyabetin oosit ve embriyo morfolojileri üzerine kalite yönünden olumsuz yönde etkilediği görüldü.Anahtar Kelimeler: Kotrollü overyan stimülasyon, PMSG, streptozotosin, ß hCG.

In this study; we investigated the effects of type I diabetes, that was achieved by streptozotocin injection, on quality of controlled ovarian hyperstimulated mice oocytes and embryos. In our study; we used 2-month year old, CD I type female (and male) mice that had at least two regular estrus cycles. These were classified into four as: control group ( having intraperitoneal citrate injection), only streptozotocin group (intraperitoneal), stimulation group (intraperitoneal PMSG+ ß hCG group), diabetes and stimulation group (streptozotocin and PMSG group). In streptozotocin injected mice groups; blood was withdrawn from tail vein and blood glucose level was measured with glucometer four days after intraperitoneal streptozotocin injection. These mice were kept for approximately one month in order to see the effects of type I diabetes on their reproductive systems. PMSG injection and 48 hours after PMSG injection, ß hCG injection was done to controlled ovarian hyperstimulated group and they were sacrified after 12-13,5 hours. In normal cycle follow-up group; estrus cycle follow-up was done by taking vaginal smear at same time interval every day and then, they were sacrified. In control group mice, estrus cycle follow-up was done by taking vaginal smear at same time interval every day and then, they were sacrified. In controlled hyperstimulated mice, ß hCG injection was done 48 hours after PMSG injection and they were sacrified after approximately 12-13,5 hours and oocytes were picked up.Female mice were sacrified and their oviduct and ovaries were dissected. Oocytes were collected from ampulla and ovaries. In the same day, male mice were sacrified and sperm was collected from epidydimis. Oocytes denudated and cumulus cell complexes were removed. Morphological quality criteria of denuded oocytes were assessed. IVF was performed with oocytes and sperm cells for fertilization. Fertilization check was done 16-18 hours after IVF. Embryos were followed up to blastocyst stage and their morphological quality assessment was done. Groups were compared and findings were discussed.As a consequence; we found that diabetes has negative effects on oocytes and embryos as a means of morphological quality visually and statistically.Key Words: Controlled ovarian hyperstimulation, PMSG, streptozotocin, ß hCG