Staphylococcal enteretoksin B (SEB)`nin immünojenitesini artırmaya yönelik yaklaşımların geliştirilmesi

Abstract

Stafilokokal besin zehirlenmesi enterojenik stafilokokların ürettiği enterotoksinler tarafından meydana gelir. Süt ve süt ürünleri; üretim, depolama, paketleme veya tüketim safhalarında mikroorganizmaların gelişimi için mükemmel bir ortam oluşur. Sütü en sık kontamine eden Stafilokok türü, Staphylococcus aureus'tur. Staphylococcus aureus tarafından üretilen en iyi bilinen iki toksin Stafilokoksik enterotoksin A (SEA) ve Stafilokoksik enterotoksin B (SEB)'dir. Stafilokokal enterotoksinler, eş zamanlı olarak antijen sunan hücrelerdeki (APC) MHC sınıf II proteinlerine ve T hücrelerindeki T hücre reseptörlerine (TCR) bağlanan protein yapısındaki süperantijenlerdir. Bu antijenlerin belirtilen reseptörlere bağlanmaları immün sistemin anormal bir biçimde aktive olmasına yol açar. Yanıt nonspesifik T hücrelerinin aşırı uyarılması ile başlar, bunu takip eden apoptozis immün supresyona yol açabilir. Bu yanıt, diyare ve abdominal kramplar gibi besin zehirlenmesi semptomlarını oluşturan çok miktarda inflamatuvar sitokinlerin ortaya çıkmasına sebep olur. Bu nonspesifik immün aktivasyon, antijene spesifik antikor yanıtlarının bozulmasına, azalmasına neden olur. Enterotoksinlerin sağlık risklerini engellemek için, süt ve süt ürünlerinin tüketiminden önce enterotoksinleri saptamaya yönelik testler geliştirilmelidir. AB standartlarına uyumlu olarak bu toksinler rutin olarak antikor bazlı test sistemleri (ELISA) ile test edilmektedir ve bu sistemler yerel olarak üretilmedikleri için bu sistemlerin temini ülke için büyük bir mali yük getirmektedir. Stafilokokal Enterotoksin B (SEB) için yerel teşhis yöntemlerinin geliştirilmesinde öncelik SEB spesifik antikorların üretilmesidir.Bu çalışmada SEB spesifik antikorların üretilmesi için bazı deneysel stratejiler değerlendirilmiştir. Bu çerçevede SEB'in yapısı DTT ve katyonizasyon ile değiştirilmiş, son ürüner 6-8 haftalık BALB/c farelerine immünize edilmiştir. SEB spesifik immün yanıtlar ELISA ile değerlendirilmiştir.

Staphylococcal food poisoning is caused by enterotoxins produced by enterogenic staphylcoccus. Milk and other dairy products provide a perfect environment for the growth of microorganisms during production, storage, packaging or consumption. One of the most common Staphylococcal species that contaminates milk is Staphylococcus aureus and the two well-known enterotoxins produced by Staphylococcus aureus are Staphylococcal enterotoxin A (SEA) and Staphylococcal enterotoxin B (SEB). Staphylococcal enterotoxins are superantigens, proteins that simultaneously bind MHC class II molecules on Antigen Presenting Cells (APCs) and T cell receptors (TCR) on T cells causing abnormal activation of immune system. The response starts with overstimulation of nonspecific T cells and subsequent apoptosis may result in immune suppression. This response is accompanied by inflammatory cytokine burst causing the typical food poisoning symptoms, diarrhea and abdominal cramps. This nonspecific immune activation leads to diminished (deteriorated) antigen-specific antibody responses. To prevent the health risks of enterotoxins, detection methods are required to be developed ready to be tested before consumption of milk and other dairy products. In accordance with EU standards, these toxins are routinely tested with antibody-based test systems (ELISA), and since these systems are not produced locally, import of these test systems brings a big financial burden for the country. For the local production of diagnostic systems for Staphylococcal Enterotoxin B (SEB), the first prerequisite is the production of SEB specific antibodies.In this study, some experimental strategies were evaluated for the generation of SEB specific antibodies. In this context, the structure of SEB was unaltered or altered by DTT and cationization and the final products were immunized into 6-8 weeks old BALB/c mice. The SEB-specific immune responses were evaluated with ELISA Assays.