Staphylococcus aureus suşlarında koloni morfolojisine, pigmentasyona ve aminoglikozid duyarlılığına ısı faktörünün etkisi

Abstract

Staphylococcus aureus herhangi bir stres ile karşılaştığında, çeşitli adaptasyon mekanizmaları geliştirir. S.aureus artan veya azalan ısıya karşı gerekli adaptasyonu sağlayarak, etkili bir şekilde cevap verebilir. S.aureus'un bazı fenotipik özellikleri, özellikle aminoglikozid duyarlılıkları, pigment üretmeleri ve koloni morfolojileri soğuk şokuna cevap verirken etkilenmektedir.Bu çalışmanın amacı, aminoglikozid düzenleyici enzim dışında S.aureus'ta aminoglikozid direncine neden olan faktörler arasında ısının rolünü araştırmaktır. Antibiyotik direnciyle pigment varlığı arasındaki ilişkiyi araştırmak bu çalışmanın ikinci, küçük koloni varyantı olan suşlarda soğuk şok proteinlerinin olmaması nedeniyle aminoglikozid direnci ile küçük koloni varyantı arasındaki bağlantı da bu çalışmanın üçüncü amacını oluşturmaktadır. Kocaeli Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi Merkez Laboratuvarı'nda izole edilen 102 MRSA (Metisilin Dirençli Staphylococcus aureus) ve 79 MSSA (Metisilin Duyarlı Staphylococcus aureus ) suşu; mannitol salt agara ekildi ve 37°C'de 20 saat inkübe edildi. S.aureus suşları; koloni morfolojileri, Gram boyama özellikleri, katalaz testi ve DNaze test sonuçlarına göre tanımlandı. S.aureus suşlarının aminoglikozid duyarlılıkları disk difüzyon testi ile belirlendi. Test edilecek S.aureus suşları 15 ml'lik triptik soy sıvı besiyerine inoküle edilerek; 37°C'de 20 saat inkübe edildi. Takriben her suş üç eşit parçaya ayrılarak her biri farklı sıcaklıklarda (15°C, 37°C ve 42°C) 1 saat inkübe edildi. Bu ön işlemin sonrasında S.aureus suşlarının aminoglikozid MİK değerleri agar dilüsyon yöntemi ile belirlendi. Farklı sıcaklıklardaki 1 saat inkübasyon sonrası pigment seviyeleri ise metanol ekstraksiyon yöntemi ile belirlendi. S.aureus suşları % 5 koyun kanlı agara ekildi ve küçük koloni özelliği gösteren, hemoliz olmayan, pigmentasyonu az ve küçük koloni morfolojisindeki suşlar arandı.Yapılan soğuk ve sıcak şokunun ardından, S.aureus suşlarının aminoglikozid MİK (Minimum İnhibisyon Konsantrasyonu) değerlerinde ufak değişmeler gözlense de duyarlılık sınırlarında değişme olmadı. S.aureus 1 saatlik 42°C'de inkübasyon sonucu daha az pigment ürettiği görüldü. Isının pigment üzerine bir etkisi olduğu görüldü fakat aminoglikozid duyarlılığına etkisi saptanmadı. S.aureus'u 1 saatten daha fazla şoka maruz bırakmak gerektiği düşünüldü. Çevresel faktörlerin S.aureus üzerindeki etkisi göz ardı edilmemeli ve bu konuda çalışmalar çoğaltılmalıdır.

When S.aureus encounters stress, it develops some kind of adaptation mechanisms. S.aureus can respond effectively by providing required adaptation against of increasing or decreasing heat. Some of the phenotypic characteristics of S.aureus, especially susceptibility of aminoglycoside, pigment production and colony morphology are being affected while responding to cold shock.The purpose of this study is to investigate the role of heat among the factors which causes aminoglycoside resistance except for aminoglycoside modifying enzyme. Second purpose of this study is to investigate the connection between the antibiotic resistance and presence of pigment and in addition to them third purpose is to investigate the connection between aminoglycoside resistance and small colony variant due to lack of cold shock proteins in the small colony variant strains. 102 MRSA and 79 MRSA which are isolated in Kocaeli University Centre Laboratory; mannitol salt agar was inoculated and incubated at 37°C for 20 hours. S.aureus was thought that can ferment mannitol. S.aureus strains were identified according to gram stain characteristics, colony morphology, catalase test and DNaze test result. Aminoglycoside susceptibility of S.aureus strains were identified by using disk diffusion method. Cells were inoculated in triptik soy broth and incubated at 37°C for 20 hours. Strain was divided into three parts which are 5 ml and they were incubated at different temperatures 15°C, 37°C, 42°C for 1 hour. After this pretreatment aminoglycosides MIC values of S.aureus strains were determined by agar dilution method. Pigment levels after 1 hour incubation at different temperatures were determined by methanol extraction method. S.aureus strains were inoculated to % 5 sheep blood agar and strains in small colony morphology were searched which are without hemolysis , show small colonies characteristic and have less pigmentation.After cold and heat shock, although small changes were observed in the MIK values of aminoglycoside, border of susceptibility did not change. It was observed that incubation of S.aureus for 1 hour at 42°C caused less pigment production. Effect of temperature on pigment production was demonstrated but effect of temperature on aminoglycoside susceptibility was not demonstrated.Effect of environmental factors on S.aureus shouldn't be ignored. Investigations about the effect of environmental factors on S.aureus should be increased.