Normozoospermik infertil hastalardan farklı seçim yöntemleri ile elde edilen spermlerin immünohistokimyasal ve elektron mikroskobik incelenmesi

Abstract

Amaç: Normozoospermik infertil hastalardan, swim up, density gradient ve mikro akışkançip yıkama yöntemleri ile elde edilen spermlerin immünohistokimyasal ve elektronmikroskobik olarak incelemesi ve uygun yıkama yöntemin belirlenmesi amaçlandı.Yöntem: 20 normozoospermik infertil hastaya ait semen parametreleri değerlendirildi.Semen örnekleri, density gradient, swim up ve mikro akışkan çip yöntemleri için 4 eşithacime ayrılarak gruplandı. Gruplara ait spermlere kromatin kondensasyon defektlerininbelirlenmesi için anilin ve toluidin mavisi boyamaları, sperm DNA fragmantasyonunun(SDF) belirlenmesi için TUNEL boyaması uygulandı. Hücre içi ROS seviyeleri flowsitometri ile ince yapı değerlendirmesi ise elektron mikroskobik olarak yapıldı.Bulgular: Konsantrasyon değerlendirmelerinde, swim up (45,65M/ml) ve mikro akışkançip (46,90M/ml) yöntemleri ile benzer sayıda sperm elde edilirken, density gradient(55,55M/ml) yöntemi ile anlamlı olarak yüksek sayıda sperm elde edildi (P<0.0001).Mikro akışkan çip ile normal morfolojili (%19,45) ve ileri hareketli sperm oranı (%83,55)diğer yöntemlere göre anlamlı olarak yüksek bulundu (P<0.0001). Bununla beraber a sınıfıhareketteki artış da diğer yöntemlere göre mikro akışkan çip ile anlamlı olarak daha yüksekbelirlendi (P<0.0001). Sperm kromatin kondensasyon defekti ve SDF yüzde oranı mikroakışkan çip yönteminde anlamlı olarak düşük bulundu (P<0.0001). Hücre içi ROSanalizlerinde DCFH ile boyanan sperm sayısı mikro akışkan çip yönteminde anlamlı olaraken düşük (%7,45) hesaplandı (P<0.0001). Elektron mikroskobik olarak tüm yıkamayöntemlerinde, granüler kromatinin ve apopitozun azaldığı ayrıca density gradientyönteminde akrozomal düzensizliklerin daha sık olduğu görüldü.Sonuç: Bu çalışmanın sonuçları; aşılama tedavisinde mikro akışkan çip yönteminin,density gradient ve swim up yıkama yöntemlerine göre daha etkili bir yöntem olduğunugöstermektedir.

Objective: In normozoospermic infertile patients, we aimed to investigateimmunohistochemical and electron microscopic examination of sperm obtained by swimup, density gradient and microfluidic chip methods as well as to determine the idealmethod.Method: Semen parameters of 20 normozoospermic infertile patients were evaluated.Each patient's semen was grouped into four equal volume, for density gradient, swim upand microfluidic chip method. Aniline and toluidine blue staining were used to identifychromatin condensation defects and TUNEL staining was used for sperm DNAfragmentation (SDF). ROS levels were determined by flow cytometry and fine structureevaluation by electron microscopy.Results: Evaluation of concentration, swim up (45.65M/ml) and micro fluid chip (46,90M/mL) was achieved with a small number of similar and sperm density gradient(55,55M/mL) significantly higher number of sperm was obtained (P<0.0001). Microfluidicchip method was found to be significantly higher in normal morphology and motionevaluations (P<0.0001). However, the rate of increase of class a movement wassignificantly higher after microfluidic chip method (P<0.0001). Sperm chromatincondensation defect and SDF were found to be significantly lower in the microfluidic chipmethod (P<0.0001). In ROS analysis, the number of sperm stained with DCFH wascalculated to be the lowest (7.45%) in the microfluidic chip method (P <0.0001). When themethods were examined by electron microscopy, it was seen that granular chromatin andapoptosis decreased and acrosomal irregularities were more frequent in the densitygradient method.Conclusions: The results of this study show that sperm obtained by microfluidic chipmethod may be more effective at insemination treatment than density gradient and swimup methods.