Testis dokusu ve sperm üzerinde kemoterapinin (bep rejimi) olumsuz etkisine karşı melatonin`in koruyuculuğunun farklı yöntemler uygulanarak araştırılması

Abstract

Amaç; Bu çalışmanın amacı; kanser tedavisinde yaygın olarak kullanılan BEP (Bleomisin, Etoposid, sisPlatin) rejiminin testis dokusu ve sperm parametreleri üzerinde oluşturduğu yan etkileri değerlendirmek ve bu etkilerin azaltılması ya da önlenmesine yönelik koruyucu bir faktör olarak antioksidan özellikte olan Melatonin uygulanmasının erkek fertilitesi üzerine etkilerini incelemektir.Yöntem; Toplam 72 adet 13-15 haftalık Wistar albino ırkı erkek sıçanlar çalışmaya dahil edildi. Deney grupları, 6 gruba ayrıldı ve her grup 12 hayvandan oluşmaktadır. Sıçanların dahil edildikleri deney grupları (G); kontrol grubu (G1), Melatonin'in kontrol grubu (etanol+salin) (G2), BEP uygulanan grup (G3), BEP uygulanan+9 haftalık iyileşme süreci içeren grup (G4), BEP+Melatonin uygulanan grup (G5), BEP+Melatonin uygulanan+9 haftalık iyileşme süreci içeren grup (G6) şeklindedir. Deney sürelerinin sonunda hayvanlardan intrakardiak infüzyonla kan örnekleri alındı ve dekapitasyondan sonra hayvanların karın bölgesi açılarak testisleri ve epididimisleri çıkarılarak ağırlıkları ölçülüp kaydedildi. Sol testislerin bir kısmı Bouin çözeltisine alınarak fikse edildi ve histokimyasal ve immünositokimyasal yöntemlerle incelendi. Diğer kısmı ise gluteraldehit solüsyonuna alınarak fikse edildi ve elektron mikroskobik yöntemle incelendi. Sağ testisler ise biyokimyasal ölçümler ve western blot çalışması için ayrıldı. Epididimisin kauda bölgesinden alınan sperm örnekleri faz-kontrast mikroskop altında incelendi. Sperm sayımı yapıldı ve spermler motilite açısından değerlendirildi. Ayrıca toluidin blue boyaması yapılarak spermin DNA bütünlüğü incelendi ve morfolojik yapısı değerlendirildi.Bulgular; Salin ve Etanol+Salin grubu sıçanların testis yapısı ve biyokimyasal parametreleri normal olarak izlendi (p<0,05). BEP grubuna ait seminifer tübüllerde vakuolizasyona, lümene dökülen immatür germ hücrelerine, dev hücrelere ve bazal lamina kalınlaşmasına rastlandı. Aynı zamanda apoptotik hücreler diğer gruplarla karşılaştırıldığında daha fazla görüldü. Biyokimyasal olarak doku ve kan örneklerine bakıldığında antioksidan seviyeleri ve testosteron seviyeleri düşük; oksidan seviyeleri, FSH (Folikül uyarıcı hormon) ve LH (Luteinize edici hormon) seviyeleri yüksekti. BEP+Melatonin ve BEP+Melatonin+Recovery gruplarının tüm değerleri kontrol grubuyla neredeyse aynıydı (p<0,05). Sonuç: BEP rejimi, testiste oksidatif stres oluşturarak yapısal bozukluklar oluşturmaktadır ve Melatonin ise antioksidan etkisiyle BEP rejiminin testiste oluşturduğu bu oksidatif hasarı düzeltmektedir.

Objective; The purpose of this study is to evaluate side effects of BEP regimen on testicular tissue, sperm structure and sperm parameters which is commonly used in cancer therapy and to investigate the protective effects on male fertility in the implementation of the antioxidant properties of melatonin as a factor for the reduction or prevention of these effects.Method; A total of 72 male Wistar albino rats, aged 13-15 weeks, were included in the study. Each experimental animal group were divided into six groups and composed of twelve rats. Rats are assigned to the following experimental groups (G): (G1) control group, (G2) control group of melatonin (ethanol+saline), (G3) BEP treated group, (G4) BEP treated group (containing a 9-week recovery period), (G5) BEP+Melatonin treated group, (G6) BEP+Melatonin treated group (containing a 9-week recovery period). At the end of the experimental period, blood samples were taken from the animals by intracardiac infusion and after decapitation, testes and epididymides were removed by opening the abdomen of the animals and their weights will be measured and stored. Left testes were fixed in Bouin solution and examined by histochemical, immunocytochemical and electron microscopy methods. Right testes were allocated for biochemical measurements and western blotting studies. Sperm samples taken from the caudal region of the epididymis were examined under a phase-contrast microscope. Sperm counts were performed and sperm were evaluated for motility. In addition, the integrity of the sperm DNA was examined and morphological structure of sperm was evaluated by performing toluidine blue staining.Results; Testicular structure and biochemical parameters were normally observed in rats of Saline and Ethanol + Saline group (p<0,05). Vacuolysis, immature germ cells, giant cells and basal lamina thickening was found in the seminiferous tubules of the BEP group. At the same time, apoptotic cells were seen more when compared to other groups. Biochemically, antioxidant levels and testosterone levels were low and oxidant levels, FSH (Follicle Stimulating Hormone) and LH (Luteinizing hormone) levels were higher in testicular tissue and blood samples. All values of BEP + Melatonin and BEP + Melatonin + Recovery groups were almost the same as the control group (p<0,05).Conclusions; The BEP regimen causes oxidative stress in the testis, resulting in structural defects, and melatonin improves the oxidative damage of the BEP regimen in the testis by the action of antioxidants.