Haemophilus influenzae kökenlerinde antibiyotik duyarlılığı ve ampisilin direnç mekanizmaları

Abstract

H. influenzae'nın tip b serotipi, beş yaş altı çocuklarda pnömoni, menenjit, bakteriyemi ve epiglotit gibi yaşamı tehdit eden invaziv enfeksiyonlardan sorumludur. H. influenzae tip b konjuge aşısının 1990'lı yıllardan sonra uygulanmaya başlamasıyla, toplum kaynaklı pnömoni, orta kulak enfeksiyonu, akut sinüzit, kronik bronşit alevlenmeleri gibi enfeksiyonlara daha çok kapsülsüz olan tiplendirilemeyen H. influenzae kökenleri neden olmaktadır.Kocaeli Üniversitesi Tıp Fakültesi Mikrobiyoloji Laboratuvar'ında çalışılan 139 H. influenzae kökeni; koloni morfolojileri, Gram boyanma özellikleri, X ve V faktör gereksinimlerine göre identifiye edildi. Serotiplendirilmesi lam aglütinasyon yöntemi ile yapıldı. Antimikrobiyal ilaçlara duyarlılıkları CLSI kriterlerine uygun olarak mikrobroth dilüsyon yöntemi ile belirlendi. Ampisiline dirençli kökenlerde beta-laktam antibiyotiklere dirençte rol alan beta- laktamaz enzimleri, IEF yöntemi, PZR yöntemi ve sekans analizi ile; zayıf BLNAR kökenlerinin direnç mekanizması ise PZR yöntemi ve sekans analizi ile belirlendi.Çalışılan 139 H. influenzae kökeninin 9'u (%6.5) tip a, 19'u (%23.7) tip b, 1'i (%0.7) tip c, 2'si (%1.4) tip d, 1'i (%0.7) tip e ve 2'si (%1.4) tip f olarak tiplendirildi. Kalan 105 (%75.5) köken ise tiplendirilemedi.Çalışılan kökenlerin 92'si (%.66.2) tüm antibiyotiklere duyarlı bulundu. H. influenzae kökenleri 38 (%27.3) köken ile T/S'ye dirençli bulunmuş olup, 16 (%11.5) köken sefaklora, 6 (%.4.3) köken ampisiline, 2'şer (%1.4) köken tetrasikline ve kloramfenikole dirençli bulundu. Çoğul direnç 13 kökende (%9.4) saptandı. Erkek çocuklarda çoğul antibiyotik direnci görülme oranı, kızlara göre daha yüksek olarak saptandı. (ki-kare=10.088, p=0.01)Beta-laktamaz pozitif ampisiline dirençli dört kökende TEM-1 beta-laktamaz tespit edildi. Ampisiline orta duyarlı ve beta-laktamaz negatif olan iki köken ise zayıf BLNAR olarak belirlendi.H. influenzae kökenlerinde henüz yüksek bir direnç oranı belirlenmemiş olmasına rağmen; zayıf BLNAR fenotipinin varlığı dikkate alınarak düzenli sürveyans çalışmalarınının yapılmasını ve klinik mikrobiyoloji laboratuvarı olarak klinisyenin uyarılması gerektiğini düşünmekteyiz.

H. influenzae type b is responsible for life threatening invasive infections like pneumonia, menengitis, bacteriemia and epiglottitis in children under five years of age. With the use of H. influenzae type b conjugate vaccine after 1990?s, infections like community acquired pneumonia, otitis media, acute sinusitis, chronic bronchitis inflammation are now caused by nonencapsulated nontypeable H. influenzae strains.In this study, 139 H. influenzae strains were identified at the Microbiology Laboratory of Kocaeli University Medicine Faculty by colony morphology, Gram stain characteristics, X and V factor requirements. Slide agglutination test was used for serotyping the strains. Antimicrobial susceptibiliy of the strains was determined by the microbroth dilution method as described by CLSI criteria. beta-lactamase enzymes, responsible for resistance to beta-lactam antibiotics in ampicilin resistant strains, were identified using IEF method, PCR method and sequence analysis. The resistance mechanism of low BLNAR strains were analyzed by PCR and sequencing.Out of the 139 H. influenzae strains studied, 9 (6.5%), 19 (23.7%), 1 (0.7%), 2 (1.4%), 1 (0.7%) and 2 (1.4%) strains were serotyped as type a, b, c, d, e and f, respectively. The remaining 105 (75.5%) strains were nontypeable.Among all the strains, 92 (11.5%) were found to be susceptible to all antibiotics. The highest percentage of antibiotic resistance was determined for T/S with 38 (27.3%) resistant strains. The number of strains resistant to cefaclor, ampicillin, tetracycline and chloramphenicol were found to be 16 (11.5%), 6 (4.3%), 2 (1.4%) and 2 (1.4%), respectively. Multiple drug resistance were identified in 13 (9.4%) strains. Mutiple drug resitance in male children was higher compared to female children (chi-square = 10.088, p = 0.01).The presence of TEM-1 beta-lactamase was identified in beta-lactamase positive ampicillin resistant four strains. Ampicillin intermediate susceptible and beta-lactamase negative two strains were identified as low BLNAR.Although, high resistance rates were not determined for H. influenzae strains, we believe that regular surveillance studies should be carried out based on the presence of low BLNAR. Furthermore, the clinical microbiology laboratory should inform the clinician about the presence of low BLNAR cases.