İnsan karaciğer, eritrosit ve uterus doku arginazının kinetik özellikleri

Abstract

71 ÖZET Bu çalışma; İnsan karaciğer, eritrosit ve uterus doku arginazının kinetik özelliklerinin saptanması amacıyla yapıldı.Çalışma materyalleri Fırat Üniversitesi Araştırma ve Uygulama Hastanesi'nin İlgili kliniklerinden sağlandı ve deneysel çalışma aynı hastanenin Biyokimya Laboratuvarında yapıldı.Çalışma metodu olarak Tiyosemikarbazid- Diasetilmonoksim-Üre (TDMU) metodu kullanıldı. Bu çalışmada insan karaciğer ve eritrosit arginazı için final konsantrasyonu 2.5 mM, uterus arginazı için ise 0.8 mM Mn+2 'm kofaktör olarak gerekli olduğu saptandı. Karaciğer için preinkübasyon ısısı 60 °C, eritrosit ve uterus için 55 °C olarak tespit edildi.Preinkübasyon süresi karaciğer ve uterus doku arginazı için 35'er dakika.eritrosit için ise 5 dakika olarak belirlendi.İnkübasyon süresi karaciğer ve uterus için 20 dakika, eritrosit için bu süre 8 dakika olarak alındı.Çalışmamızda arginaz enziminin arginine karşı Km'i karaciğer için 4.1, eritrosit için 3.1 ve uterus İçin de 5.9 mM olarak bulundu.Her üç doku İçin karbonat- bikarbonat tamponu (karaciğer ve uterus için pH 9.7, eritrosit için 9.6) kullanıldı. N-türevi bileşiklerden kanavanin'ln insan karaciğer arginaz enzimini kompetetlf olarak inhlbe ettiği ama eritrosit ve uterus doku arginazları üzerinde herhangi bir etki yapmadığı görüldü. Kanavanin, N-metll arginin ve arkain'in arginin yerine substrat olarak kullanılamıyacağı saptandı. Agmatin'in karaciğer.eritrosit ve uterus doku arginazları üzerinde herhan$ bir etkisi görülmedi. Ayrıca aninin türevlerinden L-arginin metil esteri, L-arginin etil esteri, L- arginin-L- glutamat ve L-arglnin-L-aspartat arginin yerine substrat olarak kullanılabilirler.Ama D-arginln ve L-homoarginin ile guanidin kesinlikle arginin yerine substrat olarak kullanılamazlar. p-CMBA (para-kloromerküri benzoik asit)'in karaciğer.erttroslt ve uterus doku arginaz aktivitelerini etkilememesi bu dokulara alt arginaz enziminin aktif merkezinde -SH grubu içeren amino asitlerin olmadığını göstermektedir. Çinkonun preinkübasyonda kullanılması halinde enzimin tamamiyle inaktif olduğu, inkübasyon ortamında kullanıldığında ise enzimin büyük ölçüde aktivite kaybına uğradığı görüldü.Buradan hareketle, başka enzimler için yapısal kompenent olan çinkonun arginaz enzimi için bir inhibitor olabileceği ortaya çıktı.

72 SUMMARY The aim of this study is to determine the kinetic properties of human liver.erythrocyte and uterine.Samples were obtained from the relevant clinics of Research and Practice Hospital at Fırat University and experimental study was done at the Biochemistry Laboratory of the same hospital.The method that was used in this study is Tiosemicarbazide-Diacetylmonoxime-Urea (TDMU) method. In this study.optimal Mn+2 concentration was determined as 2.5 mM for liver and erythrocyte arginase.as 0.8 mM for uterine arginase.While preincubation temperature for human liver was determined as 60 °C,the same temperature was 55 °C for erythrocyte and uterine arginase.Preincubation period was determined as 35 minutes for human liver and uterine arginase and as 5 minutes for erythrocyte arginase.While incubation period was determined for human liver and uterine arginase as 20 minutes.it was determined 8 minutes for erythrocyte arginase.The Km for arginine was obtained as 4.1 mM for liver,3.21 mM for erythrocyte and as 5.9 mM for uterine arginase.Carbonate-blcarbonate buffer (pH 9.7 for liver and uterine, pH 9.6 for erytrocyte) was used for all samples. Although it was seen that canavanine inhibites the enzyme of Uver arginase competetively.it has no effect on erythrocyte and uterine arginase.lt was determined canavanine.N-methyl arginine and arcaine cannot be used as substrate instead of arginine.The presence of agmatlne has no effect on human liver, erythrocyte and uterine arginase. Besides.it was seen that L-arginine methylester.L-arginine ethylester,L-arginine~L-glutamate and L-arginin-L-aspartate can be used as substrate instead of arginine.But D-arginine,L-homoarginine and guanidine cannot be used as substrate. As p-CMBA (para-chloromercuribenzoik acid) has no effect on arginase of human llver.erythrocyte and uterlne.it can be said that there are not amino acids with -SH grups in the active site of arginase.Arginase was totally inactivated after the addition of zinc in peincubation.The addition of zinc has decreased the arginase activity during incubation process.These results demonstrates that zinc.as structural component for some enzyms.can be an inhibitory for arginase.