Mesanede iskemi/reperfüzyon oluşturulan ratlarda leptin`in apoptozis üzerine etkisi

Abstract

Amaçlar: Ratlarda mesane İskemi/Reperfüzyon (İ/R) hasarına leptinin koruyucu etkisini immünohistokimyasal yöntemlerle apoptozis üzerinden değerlendirmek. Yöntemler: Bu deneysel çalışmada 24 adet Spraque-Dawley cinsi albino ratlar kullanıldı. Deney grupları 8'er adet ratdan oluşmaktaydı.Grup I (n?8): Kontrol Grubu, Grup II (n?8): İ/R Grubu, Grup III: (n?8):Leptin + İ/R GrubuKontrol grubundaki ratlara herhangi bir işlem uygulanmaksızın alt abdominal kesi ile mesaneleri çıkarıldı. İ/R grubunda iskemi oluşturmak için aort bifurkasyonun hemen üzerinden abdominal aorta 45 dk. oklüze edildi, takiben 60 dk. reperfüzyon yapıldı. L+İ/R grubunda ise iskemi başlatılmadan 30 dk. önce intra-peritoneal leptin uygulandı. Her iki grupta reperfüzyon süresinin sonunda ratlar sakrifiye edilerek mesane dokuları alındı. Doku malondialdehit (MDA) ve TNF-? düzeyleri ile biyokimyasal, ışık mikroskobunda Hematoksilen&Eozin boyama ile histopatolojik, TUNEL ve bcl?2 boyama yötemleriyle de apoptozis değerlendiridi. Sonuçlar: İ/R grubunda artan doku MDA ve TNF-? düzeyleri leptin tedavisi verilen (L+İ/R) grupta önemli derecede azalmıştı (p<0.01). Histopatolojik olarak gruplar karşılaştırıldığında leptin verilen tedavi grubunda (L+İ/R), polimorf nüveli lökosit (PNL) infiltrasyonu ve konjesyonda azalma tespit edildi. Ürotelyum, stroma ve kas dokusundaki TUNEL pozitif hücre sayıları İ/R grubunda belirgin olarak arttığı saptanırken, leptin verilen tedavi grubunda ise azalma gözlendi (p<0.01). Bcl?2 ile yapılan immünohistokimyasal boyama yönteminde İ/R grubunda sık rastlanan apoptotik hücrelerin, L+İ/R grubunda daha az izlendiği saptandı. Verilerimiz leptinin rat mesanesinde İ/R hasarı üzerine koruyucu etkisinin olduğunu göstermiştir.Anahtar Kelimeler: İskemi/Reperfüzyon, rat, mesane, leptin, apoptozisDestekleyen Kurum: T.İ.C.A.M

Objective: To investigate the protective effect of leptin in rats with induced ischemia/reperfusion (I/R) in bladder using immunohistochemical methods for apoptosis and biochemical parameters. Methods: In this experimental study, 24 albino rats from Spraque-Dawley genus were used. Each experimental group contained 8 rats.Group I (n?8): Control Group, Group II (n?8): I/R Group, Group III: (n?8):Leptin + I/R GroupBladders of rats in control group were removed using lower abdominal incision without performing any procedure. In I/R group, abdominal aorta was occluded just upper side of aortic bifurcation for 45 minutes for inducing ischemia, and then reperfusion was performed for 60 minutes. In L+I/R group, intraperitoneal leptin was administered 30 minutes before inducing ischemia. In both group, rats were sacrificed at the end of the reperfusion and their bladders were removed. Biochemical assessments were performed using tissue malondialdehyde (MDA) and TNF-? levels, histopathological assessments using Hematoxilin&Eosin staining in light microscope, apoptosis assesment using TUNEL and bcl?2 staining. Results: Tissue MDA and TNF-? levels were increased in I/R group, but were significantly decreased in group treated with leptin (L+I/R) (p<0.01). Histopathological comparison of the groups showed a decrease both in polymorphonuclear leukocytes and congestion in L+I/R group. TUNEL-positive cell counts in urothelium, stroma and muscle tissue were significantly increased in I/R group, but decreased in leptin group (p<0.01). With immunohistochemical staining using Bcl?2, apoptotic cells were seen frequently in I/R group, but less frequent in L+I/R group. Our findings showed that leptin had a protective effect on I/R injury in rat bladder.Key words: ischemia/reperfusion, rat, bladder, leptin, apoptosisSupporting organisation: T.I.C.A.M.