Philadelphia kromozomunun sitogenetik ve moleküler analizlerle belirlenmesi

Abstract

ÖZET Philadelphia (Ph1) kromozomunun varlığı kronik miyeloid lösemide (KML), akut miyeloid lösemide (AML) ve akut lenfoblastik lösemide(ALL) teşhis ve tedavi açısından önemlidir. Çalışmamızda 56 olguda (38 KML, 11 AML ve 7 ALL'li) kan ve kemik iliği yaymalarında iki-renkli floresans in situ hibridizasyon (FISH) analizi ile 9;22 translokasyonun molekûler düzeyde karşılığı olan bcr-abl füzyonunun tayini; sitogenetik analizi ile Ph' kromozomu ve/veya diğer sayısal/yapısal kromozom düzensizliklerinin saptanması; Ph' kromozomunun tayininde FISH ve sitogenetik analizlerin duyarlılığı ile özgüllüğünü ve bu iki yöntem arasındaki korelasyonun belirlenmesi ve 15 sağlıklı bireyde FISH analizi yapılarak bcr-abl füzyonu için cut-off değerinin bulunması amaçlanmıştır. Ayrıca sitogenetik analizle Ph' kromozomu %100 pozitif olduğu saptanan KML'li 15 olgunun kan ve kemik iliği yaymalarında kombine Giemsa/FISH tekniği ile bcr-abl füzyonunun hücrelere göre dağılımının belirlenmesi amaçlanmıştır. Kromozom analizi ile KML'li olguların %92.1 inde, AML'li olguların %9.09 unda Ph' kromozomu belirlenirken, FISH analizi ile KML'li olguların %97.4 ünde, AML'li olguların %9.09 unda belirlenmiştir. ALL'li olgularda hem sitogenetik, hem de FISH analizi ile Ph' kromozomu belirlenememiştir. Ph' kromozomunun belirlenmesinde FISH yönteminin %100 hassas ve %90 özgül iken konvensiyonel sitogenetik yöntemin %95 hassasiyette ve %100 özgüllükte olduğu belirlenmiştir. Bu düzensizliğin belirlenmesinde FISH ve rutin kromozom analizi arasında yakın korelasyon (ilişki) olduğu belirlenmiştir (r= 0.95, p<0.001). Kombine Giemsa/FISH tekniği ile kan ve kemik iliği yaymalarında bcr-abl füzyonunun tüm olguların miyeloid serideki hücrelerinde (nötrofil ve öncüleri, eozinofil, bazofil, monosit, eritrosit öncüleri ve megakaryosit) olduğu, buna karşılık sadece 1 1 olguda lenfositlerde pozitif olduğu saptanmıştır. Sonuç olarak, bu çalışmada Ph' kromozomunun belirlenmesinde FISH yönteminin sitogenetiğe göre daha güvenilir ve hassas bir yöntem olduğu belirlenmiştir. Ayrıca FISH analizinin, kan ve kemik iliği yaymalarında bcr-abl füzyonunun hücrelere göre dağılımının tespitinde de hassas bir metod olduğu gösterilmiştir. Anahtar kelimeler: Ph` kromozomu, bcr-abl genleri, FISH analizi, hücre identifikasyonu, periferik kan veya kemik iliği yaymaları, kromozom analizi. iv

SUMMARY The presence of Philadelphia (PIV) chromosome has important diagnostic and prognostic implications in chronic myeloid leukemia (CML), acute lymphoblastic leukemia (ALL) and acute myeloid leukemia (AML). In the present study, we carried out dual-color fluorescence in situ hybridization (FISH) analysis of bcr-abl fusion which is the molecular counterpart of 9;22 translocation, in blood and bone marrow smears of 56 patients (38 with CML, 1 1 with AML and 7 with ALL) moreover the Ph' chromosome and/or other numerical/structural chromosome aberrations were revealed by the standart cytogenetics techniques; the determination of sensitivity and spesificity of FISH and cytogenetic analysis for detection of Ph' chromosome, correlation with each other were aimed. Also we aimed at determining the cut-off level for bcr-abl fusion of 15 healthy individuals by FISH analysis. Besides, we aimed the rate of bcr-abl fusions in respect to each type of cells was also determined with the combined Giemsa/FISH technique in interphase cells in blood and bone marrow smears tekin from 15 patients with CML and Ph' chromosome (100%) found by cytogenetic analysis. Ph' chromosome was detected in 92.1% of all CML patients and 9.09% all AML patients by conventional cytogenetics, while the 97.4% in CML and 9.09% in AML patients by FISH analysis. However, neither standart cytogenetis nor FISH analysis were detected in ALL patients. FISH analysis demonstrated 100% sensitivity and 90% specificity, chromosome analysis was 95% sensitivity and 100% specificity for the detection of Ph' traslocation in these patients. A linear correlation was found between FISH and routine chromosome analysis (r=0.95, p<0.001). By the combined Giemsa/FISH technique on blood and bone marrow interphase cells bcr-abl fusion was found in all myeloid cell lines including the neutrophils, eosinophils, basophils, monocytes, eritroid precursors and megakaryocyte of all CML patients, but in lymphocytes of only 11 patients with CML. In conclusion, use of the FISH analysis for the detection of Ph' chromosome in the cells from leukemic patients is more sensitive and reliable method than cytogenetics. Besides, this study demonstrated that FISH had been sensitive method for the detection of the distribution of Ph' in interphase cells in blood and bone marrow smears. Key words: Ph' chromosome, bcr-abl genes, FISH analysis, identification of cell lineage, blood and bone marrow smears, chromosome analysis.