Mesane kanserli hastaların idrar örneklerinde telomeraz enzim aktivitesi

Abstract

ÖZET Telomerler, ökaryot kromozomlannın her iki ucunda bulunan, kromozom uçlarını füzyon (birleşme) ve ekzonükleazların sebep olduğu kırılma gibi anomalilerden koruyan DNA dizileridir. Telomeraz enzimi, telomeraz RNA' sı ve telomeraz proteinlerinden oluşan bir RiboNükleoProtein (RNP) kompleksi olup telomerin G'ce zengin tek dalının uzamasını sağlar. Telomeraz enzim aktivitesi, embriyonik hücrelerde, hematopoetik hücrelerde, saç foliküllerinde, tamir gören doku hücrelerinde ve ergin stem hücrelerinde yüksek oranda aktiviteye sahip olduğu halde, normal somatik hücrelerde bu aktivite ya belirlenemeyecek kadar azdır veya hiç yoktur. Telomeraz enziminin aktif olması, tümör hücre ölümsüzlüğü ve karsinogenez sürecinin işleyebilmesi için gereklidir. Malign lezyonlar yanında benign lezyonlarda da nispeten düşük oranda telomeraz enzim aktivitesinin bulunması, karsinogenez sürecinde bu enzimin rolü açısından anlamlıdır. Çok sayıda insan kanser hücre örneğinde telomeraz enzim aktivitesinin bulunuşu, bu enzimin kanser tanısı için diagnostik bir marker olabileceğini düşündürmektedir. Aynı şekilde; telomeraz enzim aktivitesinin kanserin ilerlemesine uygun bir şekilde artış göstermesi, bu enzimin tümör seyrinin takibi açısından da prognostik bir marker olabileceği fikrinin doğmasına neden olmuştur. Çalışmamızda, 7 sağlıklı ve Üroloji Anabilim Dalından temin edilen 13 mesane kanserli kişiye ait idrar örnekleri soğutmalı santrifüjde +4 °C'de 2000 rpm'de 10 dak. santrifüj edildi. Daha sonra idrar lOmM PBS ile iki defa yıkandı. Elde edilen hücre ekstraktlarına TeloTAAGGGPLUS PCR - ELİSA kitinde ki metoda uygun olarak PCR işlemi uygulandı. PCR reaksiyonunun doğruluğundan emin olmak için PCR ürünleri poliakrilamid jelde yürütüldü. Daha sonra gümüş boyama yöntemi ile bantlar görünür halegetirildi. Bunu takiben telomeraz aktivitesi TeloTAGGGPLUS PCR -ELİSA (Roche) kiti kullanılarak belirlendi. Sonuçta, telomeraz aktivitesinin kontrol grubuna göre, mesane kanserli hasta grubunda, istatistiksel olarak önemli derecede yüksek olduğu tesbit edildi. Anahtar Kelimeler: Telomeraz aktivitesi, Mesane kanseri, idrar, TRAP, idrarda telomeraz aktivitesi. vı

SUMMARY Telomeres are a series of DNA (strands), that protect the chromosomes tips located at either side of the ocarist chromosomes from such anomalies as fusion induced refraction (combination) and exonuclei. The telomerase enzyme is a RiboNucleoProtein (RNP) complex which is formed by telomerase RNA and telomerase proteins. It serves the purpose of helping the only branch rich in telomeres G to extend. Whilst the telomerase enzyme is highly active in embrionic cells, haematopoetic cells, hair follicles, tissue cells being repaired and in mature stem cells, this activity is either non- existent or weak in normal somatic cells. The activation of telomerase is essential for the indestructability of tumor cells, and for the continvation of carcinogenic process. The fact that the telomerase enzyme activation is relatively weak in malign lesions, as well as in benign lesions, is significant in terms of the role of this enzyme during the carsiogenic process. This activation is seen in the cancer cells of many people, and therefore highlights the consideration of this enzyme as an indicator for the diagnosis of cancer. In the same vain, the fact that the telomerase enzyme activation exhibits an increase in proportion to the development of cancer, has brought attention to the idea that this enzyme may be a marker for monitoring the course of the tumour. In our study, urine samples were taken from 7 healthy subjects and 13 patients with cancer of the bladder. These samples were centrifuged in a refrigatory centrifuge at + 4 °C and 2000 rpm. The urine samples were then washed twice by 10 mM PBS. The PCR process was applied to the obtained cell extracts in compliance with the metod in the Telo TAGGG PLUS PCR - ELİSA kit. To ensure that PCR reaction was accuate PCR products were implemented in polyacrilamide gel. The tapes vii TcYtesn6öCıutTlMiaMDU}were made visible by woing the silver coating method. Subsequent to this, telomerase activation was determined by using Telo TAGGG *`* PCR - ELİS A (Roche) kit. In conclusion, telomerase activation in patients with bladder cancer in comparison to the control group was found to be stastically high. Key Words: telomerase activity, bladder cancer, urinate, TRAP, urinary in telomerase activity. vm