Bor bileşiklerinin lösemi hücrelerine ve normal lenfositlere olan etkisinin hücre kültüründe ve transmission (geçirimli)elektron mikroskobunda incelenmesi

Abstract

Son yıllarda malignansiler üzerine etkilerinin ortaya çıkmasından dolayı borbileşiklerine olan ilgi gittikçe artmaktadır. Bor bileşiklerinin kanser hücreleri üzerindeproteozom inhibitörü olarak çalıştığı birçok çalışmada gösterilmiştir (13). Çalışmamızdasağlıklı insan lenfositleri ve HL-60 (lösemi) hücreleri üzerinde borik asit ve sodyum tetraborat (boraks) bileşiklerinin etkilerini ayrı ayrı MTT, Neutral Red, Akış hücremetre veGeçirimli elektron mikroskobunu kullanarak değerlendirdik. Sitotoksik etkilerini saptamakiçin 100, 250, 500, 1000 ?M konsantrasyonlarda hücrelerimize borik asit veya sodyumtetra borat verdik ve bunun için MTT yöntemini kullanıldık. Borik asitte 500 ?M'da % 50,sodyum tetra boratta ise ölü hücre oranının % 40' lara ulaştığını bulduk. Diğer taraftankontrol olarak kullandığımız sağlıklı insan lenfositlerinde bu oran en yüksek dozda bile %20' leri geçmemektedir. Lizozomal aktivite açısından etkileri görebilmek için dehücrelerimizi nötral kırmızısı boyasıyla boyadık. Aynı konsantrasyonlarda her iki bileşiktede % 10 kadar lizozomal aktivitede bir azalış saptadık. Sağlıklı insan lenfositlerinde velösemi hücrelerinde borik asit ve sodyum tetra boratın apoptotik etkisini akridin oranj ileakış hücremetrede değerlendirdik. Borik asitin 1000 ?M olan konsantrasyonunda sağlıklılenfositlerde % 2,5, HL-60 hücrelerinde % 8,8 apoptotik etki bulduk, sodyum tetra borattaise 1000 ?M da sağlıklı lenfositlerde % 3,1, HL-60 hücrelerinde ise % 4,9 apoptotik etkibulduk. Bor bileşiklerinin akut lösemi hücreleri üzerindeki ince yapı değişikliklerinisaptayabilmek için transmission (geçirimli) elektron mikroskobunda inceledik. Borik asit500 ?M konsantrasyonunda hem akut lösemi hücrelerinde hem de lenfositlerde çiftnukleus ve mikronukleus oluşturdu. Akut lösemi hücrelerinde mitokondrilerin boyutlarındabüyüme, kristalarında deformasyonlar ortaya çıktığını saptadık.Bizim sonuçlarımıza göre, sağlıklı lenfositlerle akut lösemi hücrelerinikıyasladığımızda bor bileşikleri lösemi hücrelerine daha etkilidir ve bu toksik etkiyimitokondriler üzerinden göstermektedir

Recently, as the effects of malignancies have come out, the attention on boroncompounds has been taken and is gradually increasing. There are experiments in whichboron compounds work as a proteosom inhibitor on cancer cells (13). In our study, weinvestigated the effects of boric acid and sodium tetra borate on MTT, Neutral Red, Flowcytometry, transmission electron microscope methods on acute leukemia cell lineage andhealthy human lymphocyte. We used MTT method to evaluate cytotoxic effect byfollowing the one night incubation of leukemic cells in 100, 250, 500, 1000 ?Mconcentrations with boric acid and sodium tetra borate. We found that in boric acid at 500?M there were dead cells at the rate of % 50 and in sodium tetra borate at the rate of % 40.On the other hand, in healthy human lymphocytes used as a controller this rate did notreach % 20s even in the highest concentration. In terms of lysosomal activity to see theeffects we dyed the cells with the neutral red by following the one night incubation of boricacid and sodium tetra borate in 100, 250, 500, 1000 ?M concentrations. We detected adecrease % 10 in both compounds in the same concentrations and in the lysosomal activity.We evaluated the apoptotic effect of boric acid and sodium tetra borate to lymphocyte andleukemic cell line by flow cytometry using acridine orange methods. Apoptotic effect wasfound boric acid 1000 ?M concentration % 2,5 in normal lymphocyte, 1000 ?Mconcentration % 8,8 HL-60 cell lines and sodium tetra borate 1000 ?M concentration %3,1 normal lymphocyte, 1000 ?M concentration % 4,9 HL-60 cell lines respectively. Weexamined the boron compounds by means of transmission electron microscope method todetect their effects on the acute leukemia cells. We observed that boric acid in 500 ?Mconcentration caused the double nucleus and micronucleus formation in both acuteleukemia cells and lymphocytes. We determined that an expanding in the dimension ofmitochondrium and a deformation in cristas appeared.According to our results, boron compounds show a toxic effect on the acuteleukemia cells with comparing normal lymphocyte and this effect is via with themitochondrial pathway.