Dietilnitrozamin ve fenobarbital uygulanan ratlarda dipyrido[ 3, 2-a:2`, 3`- c]phenazine (DPPZ) au(ııı) kompleksinin apoptotik proteinler ve ubikuitin sistem üzerine etkileri

Abstract

Dietilnitrozamin (DEN) ve fenobarbital (FB) vererek deneysel kanser modeli oluşturmayı hedeflediğimiz çalışmamızda, apoptotik özelliği olan dipyrido[3, 2-a:2', 3'- c]phenazine (dppz) Au(III) kompleksinin ([Au(dppz)Cl2]Cl) karaciğer dokusunda p53, kaspaz 3, Bcl-2, Bax, DNA fragmantasyonu ve ubikuitin üzerine etkileri araştırıldı.Bu çalışmada, 48 erkek Spraque-Dawley türü sıçanlar her grupta 8 adet olacak şekilde, grup I (kontrol grubu), grup II (Dimetil sülfoksit (DMSO)), grup III ([Au(dppz)Cl2]Cl), grup IV (DEN+ FB), grup V (DEN+FB+[Au(dppz)Cl2]Cl (2. hafta)) ve grup VI (DEN+FB+[Au(dppz)Cl2]Cl (7. hafta)) olmak üzere 6 gruba ayrılmıştır. Dietilnitrozamin sıçanlara bir defa olmak üzere 175 mg/kg intraperitoneal (i.p.) olarak verildi. Dietilnitrozamin uygulamasından 2 hafta sonra FB 500 ppm olacak şekilde günlük olarak uygulandı. [Au(dppz)Cl2]Cl uygulaması grup V'te DEN uygulamasından 2 hafta sonra başladı ve haftada bir kez 2 mg/kg olmak üzere i.p. olarak verildi. Grup VI'da ise ([Au(dppz)Cl2]Cl kompleksi DEN uygulamasından 7 hafta sonra başladı ve sıçanlara haftada bir kez 2 mg/kg (i.p.) olmak üzere uygulandı. Deney toplam 13 hafta sürdü. 13. haftanın sonunda sıçanlardan kan ve doku örnekleri alındı. Serumda AST, ALT, LDH düzeyleri, karaciğer dokusunda kaspaz 3, p53, Bax, Bcl-2, ubikuitin ve DNA fragmantasyonu ölçüldü. Karaciğer dokuları histopatolojik olarak değerlendirildi. Grup IV, grup I ile karşılaştırıldığında AST, ALT, LDH, Bcl-2 ve ubikuitin düzeylerinde artış belirlenirken kaspaz 3 ve p53 düzeylerinde azalma belirlendi. Grup IV'te preneoplastik fokus bulgusu mevcuttu. Grup V, grup IV ile karşılaştırıldığında kaspaz 3, p53, Bax ve DNA fragmantasyonu değerlerinde artış gözlendi. Grup VI'da ise grup IV'e göre kaspaz 3 ve p53 düzeylerinde artış belirlendi.Sonuçlarımız, DEN ve FB uygulaması ile oluşturulan hepatosellüler karsinoma modelinde, [Au(dppz)Cl2]Cl kompleksinin kaspaz 3, p53 seviyelerinde artışa ve DNA fragmantasyonuna neden olarak apoptozu indüklediğini göstermektedir. Bu durum kanserli dokularda görülen proliferasyona karşı [Au(dppz)Cl2]Cl kompleksinin etkili olabileceğini düşündürmektedir.

UMMARYIn our study, we aimed to create a cancer model by administrating diethylnitrosamine (DEN) and fenobarbital (FB). We investigated the effects of an apoptotic complex, dipyrido[3, 2-a:2?, 3?- c]phenazine (dppz) Au(III) ([Au(dppz)Cl2]Cl), on liver p53, caspase 3, Bcl-2, Bax, DNA fragmentation, and ubiquitin levels.In this study, 48 male Spraque-Dawley rats divided into 6 groups (8 animals in each group); group I (control), group II (Dimethyl sulfoxide (DMSO)), group III ([Au(dppz)Cl2]Cl), group IV (DEN + FB), Group V (DEN+FB+[Au(dppz)Cl2]Cl (2nd week)) and grup VI (DEN+FB+[Au(dppz)Cl2]Cl (7th week)). Rats were administrated with diethylnitrosamine in a single dose of intraperitoneal (i.p.) 175 mg/kg. After 2 weeks of diethylnitrosamine administration, rats were given daily FB in the dose of 500 ppm. In group V, after two week of DEN administration, [Au(dppz)Cl2]Cl 2 mg/kg i.p. was given once a week. In the group IV animals given weekly 2 mg/kg [Au(dppz)Cl2]Cl complex, 7 weeks after DEN administration. Experiment lasted for 13 weeks. 13 weeks after, blood and tissue samples collected from the rats. Serum AST, ALT, LDH levels and liver caspase 3, p53, Bax, Bcl-2, ubiquitin and DNA fragmentation levels were measured. Liver samples were evaluated histopathologically. AST, ALT, LDH, Bcl-2 and ubiquitin levels were higher in group IV, compared to group I, but caspase 3 and p53 levels were lower. There was preneoplastic focus in group IV. In group V, caspase 3, p53, Bax and DNA fragmentation levels higher than those of group IV. Caspase 3 and p53 levels were increased in group VI compared with group IV.Our results indicate that, in a hepatocellular carcinoma model created with DEN and FB administration, [Au(dppz)Cl2]Cl complex induces apoptosis by elevating caspase 3, p53 levels and DNA fragmentation. This suggests, [Au(dppz)Cl2]Cl complex may be effective on proliferation seen in cancers.Key Words: Caspase 3, p53, bax, bcl-2, ubiquitin, [Au(dppz)Cl2]Cl