Köpek polimorfonükleer nötrofillerinde Toxoplasma gondii`ye karşı gelişen netosis reaksiyonunun ın vitro araştırılması

Abstract

Toxoplasma gondii'nin insan, fare, sığır, koyun, kedi ve eşek nötrofillerinde hücre dışı tuzak geliştirdiği bildirilmiştir. Bu tez çalışmasında in vitro ortamda Toxoplasma gondii tachyzoitleri ile karşılaşan köpek polimorfonükleer lökositlerinde (PMN) şekillenen hücre dışı tuzak yapılarını araştırmak amaçlanmıştır. Hücre dışı tuzakların şekillenmesinde parazit konsantrasyonu ile inkubasyon süresi etkisinin belirlenmesi hedeflenmiştir. Ayrıca T. gondii'ye karşı şekillenen NETosis reaksiyonunda reaktif oksijen ürünleri (ROS), myeloperoksidaz (MPO) ve nötrofil elastaz (NE) aktiviteleri de belirlenmiştir. Köpek PMN'i Percoll dilusyonları (%45, %54, %63 ve %72) kullanılarak izole edilmiştir. In vitro ortamda tachyzoitler ile inkubasyon sonrasında köpek PMN'ninde bulut görünümünde, DNA yapısındaki hücre dışı tuzaklar izlenmiştir. NETosis reaksiyonunun tipik özelliği olan histonlar (H3) ile MPO ve NE aktiviteleri tespit edilmiştir. Tachyzoitler hücre dışı tuzak yapılarının arasında izlenmiştir. Parazitin konsantrasyonu ile hücre dışı tuzak oluşumu arasında pozitif korelasyon saptanmıştır. Ancak aradaki farklılık istatistiksel olarak önemsiz bulunmuştur. PMN-tachyzoit kültüründe açığa çıkan hücre dışı tuzakların inkubasyonun 60. dakikasına kadar arttığı saptanmıştır. İnkubasyon süresince açığa çıkan ROS, MPO ve NE miktarında zamana bağlı artış şekillenmiştir. Ancak, bu aktiviteler pozitif kontrolde daha yüksek ölçülmüştür. Pozitif kontrol olan phorbol myristate acetate'ın köpek nötrofilleri için NETosis yönünde iyi bir aktivatör olduğu tespit edilmiştir.

Toxoplasma gondii is known to develop extracellular traps in human, mouse, cattle, sheep, cat and donkey neutrophils. The study aimed to investigate the extracellular trap structures formed in dog polymorphonuclear leukocytes (PMN) to T. gondii tachyzoites in vitro. This study aimed to determine the effects of different parasite concentration and incubation time on the formation of extracellular traps. Also, reactive oxygen species (ROS), myeloperoxidase (MPO) and neutrophil elastase (NE) activities were determined in NETosis reaction against T. gondii. Dog PMN was isolated using Percoll dilutions (45%, 54%, 63%, and 72%). After incubated with tachyzoites, cloud-like extracellular traps in DNA structure originated from the dog PMN were observed in the extracellular areas. Histones (H3), MPO and NE, characteristic features of NETosis reaction, were detected in extracellular areas. The tachyzoites were observed between extracellular trap structures. A positive correlation was detected between parasite concentration and extracellular traps formation. However, the difference was found statistically significant. The extracellular traps released in the PMN-tachyzoite culture increased until the 60th minute of incubation. ROS, MPO, and NE released during the incubation period were shaped by a time-dependent increase. The positive control, phorbol myristate acetate, was found to be a good activator of NETosis for canine neutrophils.