Silimarin ile tedavi edilen tiyoasetamid indüklü kronik hepatik ensefalopatili sıçanlarda miRNA profilinin belirlenmesi

Abstract

Hepatik ensefalopati (HE), karaciğerdeki fonksiyon bozulması sonucu gelişen beyin hasarını tanımlayan bir terimdir. Deneysel karaciğer hasarı oluşturmada D-galaktozamin, karbontetraklorür ve tiyoasetamid (TAA) gibi birçok hepatotoksin kullanılmaktadır. Silimarin (Sm), deneysel karaciğer hasarlarında anti-oksidan, anti-lipid peroksidatif, anti-inflamatuar, hücre zarını koruma, bağışıklık sistemini güçlendirme ve karaciğer yenileme gibi özellikleri olan polifenolik bileşiktir. Bu deneysel çalışmada sıçanlara intraperitoneal TAA verilerek oluşturulan HE'de gelişen karaciğer ve beyin hasarına karşı oral uygulanan Sm'nin olası koruyucu etkileri araştırılmıştır. Bu amaçla 28 adet Sprague Dawley cinsi erkek sıçan her grupta 7 hayvan olacak şekilde 4 gruba [Kontrol (ilk 14 gün % 0.2 DMSO ikinci 14 gün % 0.9 SF), TAA (ilk 14 gün % 0.2 DMSO ikinci 14 gün 50 mg/kg TAA), 50+50 ve 100+50 mg/kg Sm+TAA verilen 3. ve 4. gruplar (ilk 14 gün Sm ikinci 14 gün TAA) uygulanmıştır] ayrıldı. Deney sonunda anestezi altında kalpten alınan kanın bir kısmından kan sayımı (WBC, RBC, PLT, hemoglobin) yapıldı. Kalan kandan ise serum (GPx, TAS, TOS, ürik asit, BUN, ALT, AST, ALP, LDH) ve plazma (MDA) elde edildi. Akabinde karaciğer, beyin ve beyincik dokuları alınarak histolojik ve immünohistokimyasal (ihk) olarak incelendi. Sadece TAA verilen deney grubunda karaciğer ve beyin dokularındaki hasar hem histolojik hem de ihk (Bcl-2 aktivitesi azalırken Bax, kaspaz-3, Tunel ve TNF-α aktiviteleri arttı.) ve biyokimyasal olarak gözlendi. Ayrıca periferik kanda lökosit ve trombosit sayıları önemli oranda yükseldi. TAA nedenli hasar karaciğer doku homojenatından ölçülen miRNA-122, miRNA-192 ve miRNA-194 seviyelerinin azalmasıyla da doğrulanmıştır. İhk sonuçlarına göre TAA'nın beyinde hasar yapıp beyincikte yapmamasının kan beyin bariyerinin heterojen yapısından kaynaklandığı düşünülmektedir. Sm'nin özellikle yüksek dozunun TAA nedenli karaciğer ve beyin hasarlarını önlemede oldukça etkili olduğu hem histolojik hem de biyokimyasal ve ihk olarak gözlenmiştir. Bu çalışma Eskişehir Osmangazi Üniversitesi Yerel Hayvan Etik Kurulunun izni ile yapılmıştır (No: 513-2/2016).

Hepatic encephalopaty (HE) is a term which describe brain damage caused by liver dysfunction. To create experimental liver damage has been used several hepatotoxin such as D-galaktozamin, carbontetrachloride ve thioacetamide (TAA). Silymarin (Sm) is polyphenolic compound being properties such as anti-oxidant, anti-lipid peroxidative, anti-inflammatory, cell membrane protection, immune system enhancing and liver renewal. In this study, the possible protective effects of Sm that was administered orally were investigated against brain and liver damage which were induced by TAA intraperitoneally. For this purpose, total 28 male Sprague Dawley rat were divided into 4 equal group [Control (the first 14 day % 0.2 DMSO, the second 14 day % 0.9 SF), TAA (the first 14 day % 0.2 DMSO, the second 14 day TAA), 3. and 4. groups given that 50+50 ve 100+50 mg/kg Sm+TAA (the first 14 day Sm, the second 14 day TAA) were administrated].At the end of the experiment, blood count (WBC, RBC, PLT, hemoglobin) was some part of the blood taken from the heart taken under anesthesia. Serum (GPx, TAS, TOS, ürik asit, BUN, ALT, AST, ALP, LDH) and plasma (MDA) were obtained from remaining blood. Subsequently liver, brain and cerebellum tissues were removed and they were examined histologically and immunohistochemically. In only TAA treatment group was observed liver and brain damage biochemically, histologically and immunohistochemically (Bax, caspase-3, TUNEL, TNF-α activites increase whereas Bcl-2 activity reduced). In addition, the number of leukocytes and platelets increased significantly in peripheral blood. TAA-induced damage was also confirmed by decreased levels of miRNA-122, miRNA-192 and miRNA-194 measured from liver tissue homogenate. According to the immunohistochemical results, it has been thought that it does not damage to the cerebellum while TAA damage to the brain derive from heterogeneous structure of the blood-brain barrier. It has been observed that especially high doses of Sm are highly effective in preventing liver and brain damage caused by TAA, both histologically and immunohistochemically and biochemically. This study was conducted with the permission of the Local Animal Ethics Committee of Eskişehir Osmangazi University (No: 513-2/2016).