Kininil-B12 ve indol-3-asetil-B12 türevlerinin sentezi UV ve floresans özelliklerinin incelenmesi

Abstract

-59- 5 ÖZET Çalışmanızda floresans özelliğe sahip k in in ilk o- balamin ve indol-3-aset ilkobalamin olmak üzere iki koba- lamin türevi sentezlendi. Alkil kobalamin sentezlerine uygun şartlarda, çözeltilerden azot gazı geçirilerek ok sijenin tamamen uzaklaştırıldığı bir sistemde ve ışıktan korunarak çalışıldı. Siyanokobalaminin kobaltnitrat içeren etanoldaki çözeltisine sodyumborhidrür ilave edilerek Co+ içeren siyanokobalarain Co+ içeren Bı29'e indirgendi. Bi2s ^~nid~ robromkinin veya EEDO varlığında indol-3-asetik asitle reaksiyona sokularak sırasıyla kin in ilkobalamin ve indol- 3-aset ilkobalamin sentezlendi. Ürünler fenolün diklormetan da çözünmesiyle hazırlanmış fenol çözeltisi ile ekstrakte edildi, geri ekstraksiyonla tekrar sulu faza alınan örnek ler karboksimetilsellüloz kolonunda fraksiyonlarına ayrıldı. Türevler 0,015 N HPS0A ile yıkanarak kolondan çıkarıldı, nötralleşt irilerek tekrar fenol ekstraksiyonundan sonra 50 nin altında düşük baskı döner buharlaştırıcıda deriştiri lerek sulu asetondan kristallendirildi. Türevlerin karakterizasyonu Whatman No:l kağıdı kul lanılarak kağıt kroraatograf isi ile yapıldı. Oç farklı yürü tücü sistem denenerek Rf değerleri saptandı. Kobalamin ana- loğlarının su, «etanol, ve 0,01 N H2S04 çözgenlerinde uv ab_-60- sorbsiyon spektrumlan alınarak maksimum soğurum gösterdik leri dalga boyları ve molar absorbsiyon katsayıları saptan dı. Siyan o, kininil ve indolasetilkobalaminin sulu çözelti leri ile kalibrasyon grafikleri çizilerek türevlerin UV ile tayin edilebilecekleri konsantrasyon aralıkları saptandı. Türevlerin UV'de maksimum soğurum gösterdikleri dal ga boyları seçildi ve bu dalga boyunda uyarma yapılarak flo- resans ölçümleri alındı. Kullanılan üç çözgen sisteminden metanolde her iki bileşik de ölçülebilir bir floresans ver memiştir. 0,01 N H2S04'li çözeltide, 5xl0-6- 5xlo`5M derişim bölgesinde indol-3-asetilkobalamin 276 nm'de uyarıldığında 400 nm civarında derişimle artan fakat orantılı olmayan bir floresans göstermiş, sulu çözeltisinde ölçülebilir bir flo resans elde edilememiştir. 0,01 N H SO * li ortamda 271 nm'de -4 -5 uyarıldığında kininilkobalamin, 1x10 - 4x10 M derişim aralığında 420 nm'de, derişim azaldıkça artan ve derişimle doğrusal olarak değişen bir floresans şiddeti vermiştir «De rişim 5xlo` M* a kadar azaltıldığında floresans 350 nm dalga boyuna kaymış ve derişimle düzenli olmayan bir floresans şid deti değişimi göstermiştir. Kininilkobalamin in sudaki flore sans spektrurau 0,01 N H SO 'dekine benzerdir. Sadece pikler -5 genişlemiş ve ölçülebilen derişim sınırı 10 M` a düşmüştür. T. C. `'Tefim Kurula yon Merkezi

-61- 6 SUMMARY In this study, two cobalamin derivatives showing fluorescence phenomenon, namely quininylcobalamin and indole-3-acetylcobalamin were synhesized. Syntheses were carried out within reaction vessels shielded with alumi num foil against light. All of the solutions used during the course of the study were deoxygenated by passing ni trogen through them and all the reactions were performed under nitrogen atmosphere. Cyan ocob alam in was reduced to 8,, adding an eth- anolic solution of sodlumborohydride to the ethanolic so lution of cyanocobalamin and cobaltnitrate. İndole-3-acetyl* cobalamin and quininylcobalamin were then synthesized by reacting B12a with indole-3-acetic acid and p-hydrobrom- quinin in the presence of EEDQ, respectively. The prod ucts were obtained by the `phenol exctraction` process, and purified in a carboxymethyl cellulose column. The elu- ates were concentrated below 50 9C in a rotary evaporator and crystallized by acetone addition. The derivatives were characterized by paper chroma tography, Whatman No:l paper. R- values were determined by useing three different solvent systems. The UV visible spectra of these cobalamin analogues were taken in water, methanol and 0,01 N H_S0. separately and X` and £ val- 2 4 max ues were obtained for each solvent. The calibration curves-62- were plotted by means of the spectra of aqueous solutions and the suitable concentration ranges for the quantitative determination were found. The fluorescence spectra were recorded in all three solvents at each ftw found above. Neither of the compounds max has given a measurable fluorescence methanol. İndole-3-ace- tylcobalamin » in 0.01 N H.SO. at the concentration range -6 -5 5x10 - 5x10 M, has exhibited a fluorescence around 400 nm in creasing with cocentration, but not proportionately, when excited at 276 nm ; however, no measurable fluorescence has been observed in aqueous solution. As for quininylcobal- amin in 0,01 N H2S0, at the concentration range 1x10 - -5 i 4x10 m, it has given a fluorescence at A »420 nm, incre asing proportionately with decreasing concentration, when excited at A»271 nm. When the concentration has been low ered up to 5x10` M, the wavelength at which the fluores cence is observed has shifted to 350 nm, and the variation of the fluorescence intensity with concentration is not regular. The fluorescence spectrum of quininylcobalamin in aqueous solution is similar to that in 0t01 N H2S04 ' except the peaks are broader and the concentration limit -5 for the quantitative determination decreases to 10 M.