Sivrisinek mücadelesi için yeni Bacillus formülasyonlarının geliştirilmesi

Abstract

Çalışmamızda öncelikle sivrisinek mücadelesinde kullanılan Bacillus thuringiensis ile Bacillus sphaericus türlerine ait yeni suşların izolasyonu yapılmıştır ve daha sonra izolatların toksin proteini içerip içermediği belirlenmiştir. Bu amaçla Ege Bölgesi'nden değişik habitatlardan alınan toprak ve su örneklerinden asetatlı seçilim yöntemi ile 1097 adet olmak üzere toplam 1574 adet izolat elde edilmiştir. Faz kontrast mikroskobu kullanılarak incelenebilen 850 adet izolatın toksin proteini içerdiği gözlenmiştir. Toksin protein ürettiği belirlenen izolatların 160 tanesi, Culex sp. larvaları üzerinde biyolojik etkinlik testlerinin yapılabilmesi için laboratuvar ölçeğinde üretilmiştir. Laboratuvar ölçeğinde üretimler için T3, NY (NutrientYeast) ve NYSM (NutrientYeast Salt Medium) ortamları ile denemeler yapılmış ve denemeler sonucunda NYSM ortamının en uygun üretim ortamı olduğuna karar verilmiştir. Biyolojik etkinlik testleri sonucunda yüksek biyolarvasidal aktivite (%85.33) gösterdiği saptanan 30-2 kodlu izolatın laboratuvar ölçeğinde üretimi için bazı parametrelerin optimizasyonu yapılmıştır. Optimizasyon işlemi için Design-Expert 9.0.0 programı ile RSM analizi yapılmış, deney tasarımı olarak, merkezde 6 tekrarı içeren 23-tam faktöriyel merkezi kompozit tasarımı (`23-full factorialcentralcompositedesign, CCD`) uygun bulunmuştur. Optimizasyon sonucunda 30-2 kodlu izolatın en iyi ürediği koşullar pH: 6,76, karbon kaynağı oranı (%) : 1,70 ve inokulum miktarı (%) : 4,68 olarak belirlenmiştir. Ayrıca bu izolat için 5 günlük üretim süresinin uygun olduğu belirlenmiştir.

Our study primarily focused on the isolation of new strains from Bacillus thuringiensis and Bacillus sphaericus species. With this aim in mind, various soil and water samples taken from different habitats in the Aegean Region in Turkey were analyzed. 1097 isolates of 1574 isolates were obtained by the acetate selection method. Toxin protein content of 850 isolates were determined with phase contrast microscope. 160 isolates containing toxin protein were used to produce lab scale quantities of endospores and toxin proteins. T3, NY (NutrientYeast) and NYSM (Nutrient Yeast Salt Medium) media were compared and NYSM medium was determined for the best production medium. As a result of the biolarvacidal activity test of strains, it was determined that the Bacillus sp. 30-2 coded isolate had high biolarvacidal activity (85.33%). Afterwards, some parameters of Bacillus sp. 30-2 were optimized for producing lab scale. Design Expert 9.0.0 programme was used for RSM analysis and 23-full factorial central composite design, CCD was found suitable for optimization. Optimum conditions were determined as pH: 6.76, carbon source ratio (%) : 1.70 and inoculum ratio (%) : 4.68 at the end of optimization studies. In addition optimum time for production was determined as 5 days.