Hepatit B virüs yüzey antijeninin (HBsAg) saptanmasına yönelik HBsAg-ELISA tanı kiti yapılması ve değerlendirilmesi

Abstract

51 6. ÖZET Hepatit B infeksiyonunun serolojik tanısında sıklıkla ELISA testi kullanılmaktadır. Ancak tanı kitlerinin tamamı yurtdışından temin edilmektedir. Bu çalışmada niteliksel bir HBsAg-ELISA testinin yapılması planlandı. Bu amaçla, laboratuvanmızda daha önce üretilmiş olan anti-HBs IgM ve anti-HBs IgGl salgılayan hibridoma hücrelerinden elde edilen monoklonal antikorlar kullanıldı. Anti-HBs IgM ve anti-HBs IgGl monoklonal antikorlar hem `adw` ve `ayw` subtip antijenlere hem de `ad` + `ay` kaplı katı faza bağlanmaktadır. Anti-HBs IgM, fare asit sıvısından `size exclusion chromatography` sonrası bulaş IgG eliminasyonu için protein G kolonundan geçirilerek saflaştınldı. Anti-HBs IgGl için doğrudan hibridoma kültür süpernatanı kullanıldı. HBsAg-ELISA testi için 96 çukurlu plaklar anti-HBs IgM ile kaplandı. Serum örneklerinin inkübasyonu sonrasında çukurlara anti-HBs IgGl eklendi. Anti-HBs IgM- HBsAg-anti-HBs IgGl bağlanması ise peroksidaz işaretli `anti-mouse IgG` kullanılarak saptandı. Kemiluminesan sisteme dayalı Access otoanalizör ile HBsAg (+) olduğu saptanan 228, HBsAg (-) olan 72 serum örneği HBsAg ELISA testi ile tekrar çalışılarak karşılaştırma yapıldı. Laboratuvanmızda hazırlanan HBsAg-ELISA testinin tanısal duyarlılığı %96,5, tanısal özgüllüğü ise %100 olarak belirlendi. Sonuç olarak hazırlanan HBsAg-ELISA testinin tanısal duyarlılık oranı yükseltildikten sonra serolojik tanı amacıyla kullanılabileceği öngörüldü.

52 7. SUMMARY ELISA is frequently used for serological diagnosis of Hepatitis B infection. However, all diagnostic kits are purchased from abroad. In this study we aimed to produce a qualitative HBsAg-ELISA test. Monoclonal antibodies purified from anti-HBs IgM or anti-HBs IgGl producing hybridoma cells, which were produced in our laboratory previously, were used for this purpose. Anti-HBs IgM and anti-HBs IgGl monoclonal antibodies reacted with `adw` and `ayw` subtype HBsAg and they bound to `ad` + `ay` coated solid phase as well. Anti-HBs IgM was purified from murine ascites fluid by using size-exclusion chromatography followed by protein G affinity chromatography in order to eliminate IgG contamination. Anti-HBs IgGl was directly used as the culture supernatant of hybridoma cells. High binding capacity 96 well plates were coated with anti-HBs IgM to capture HBsAg. After incubation with serum samples, anti-HBs IgGl was added into wells. AntiHBs IgM-HBsAg-antiHBs IgGl chain was detected by using peroxidase-labeled anti-mouse IgG. 228 HBsAg (+) and 72 HBsAg (-) serum samples, characterized by a chemiluminescence-based Access® autoanalyser, were re-tested with HBsAg-ELISA and the results were compared. Diagnostic sensitivity and diagnostic specificity of our lab-made HBsAg ELISA test were found to have ratios as 96,5% and 100% respectively. As a result, it was predicted that this HBsAg-ELISA test could be used for serologic diagnosis after an improvement in its diagnostic sensitivity.