Candida Albicans`ın fare modelinde kan ve çeşitli organlarda PCR (polymerase chain reaction) ile gösterilmesi

Abstract

46 7. ÖZET Candida albicans kanser tedavisi, solid organ veya kemik iliği transplantasyonu nedeniyle immunsüpresif kemoterapi alan ve çeşitli cerrahi müdahalelere maruz kalan hastalarda mortalitesi yüksek olan sistemik infeksiyonlara neden olabilmektedir. Sistemik kandidiyazisin tanısı genel olarak kültüre ve doku biyopsi Örneklerine dayanmaktadır. Ancak bu hastalarda erken tanı çok önemli olduğu halde kültürün sonuçlanması en az 2 gün sürmektedir. Bu nedenle bu çalışmada çok daha kısa zamanda sonuç verebilen PCR yönteminin sistemik kandidiyazis tanısındaki kullanılabilirliği ve duyarlılığı fare modelinde kültür ile karşılaştırılarak araştırılmıştır. PCR yönteminde E03 geninin C. albicans'a spesifik olan 125 baz çiftini hedef alan bir çift primer kullanılmıştır. PCR' m alt saptama limiti 100 ul insan kanında 150-200 C. albicans hücresi olarak belirlenmiştir. Farelere 106 C. albicans hücresi verildikten 30 dakika sonra alınan kan, karaciğer, akciğer, böbrek ve dalak örneklerinde C. albicans DNA'sı gösterilebilmiştir. Karaciğer, akciğer ve böbrek örnekleri için elde edilen sonuçlarda kültür ve PCR arasında % 100 uyum saptanmıştır. Ancak çalışmaya alınan 10 kan ve 10 dalak örneğinin hepsinde kültür ile üreme saptandığı halde PCR ile 8 kan ve 7 dalak örneği pozitif olarak tespit edilmiştir. PCR' in kültüre göre çok daha hızlı sonuç vermesi ve özgül olması nedeniyle, C. albicans infeksiyonu tanısında, kültür ile birlikte kullanılabilecek bir yöntem olduğu sonucuna varılmıştır.

47 8. SUMMARY Candida albicans may cause systemic infections with high mortality in patients undergoing various surgical procedures, taking immunosuppressive chemotherapy because of solid organ or bone morrow transplantation and cancer. The diagnosis of systemic candidiasis generally depends on tissue biopsy specimens and culture. Though the early diagnosis is very important for these patients, the resulting of the culture takes at least two days. For this reason, we investigated the usability and sensitivity of the PCR methodology, which results much earlier, in the diagnosis of sytemic candidiasis in comparision with culture in mouse model in this study. In the PCR method we used a pair of primers specific for the 125 base pairs of E03 gene of C. albicans. The lowest detection limit of PCR has been defined as 150-200 C. albicans cells in 100 /x/ of human blood specimens. We were able to show the DNA of C. albicans in the blood, liver, lung and spleen specimens taken after 30 min of giving 106 C. albicans cells to the mice. The results of culture and PCR showed %100 concordance in the liver, lung and kidney specimens. On the other hand, while C. albicans was isolated in all of the 10 blood and spleen specimens in culture, only 8 blood and 7 spleen specimens gave positive results with PCR method. It is concluded that, being sensitive and giving more rapid results than culture, PCR is a diagnostic tool along with culture in the diagnosis of C. albicans infections.