İnsan embriyolarında hızlı ve yavaş dondurma yöntemlerinin çözme sonrası elde edilen gebelik parametrelerine etkisi ve zaman içinde değişimi

Abstract

Bu retrospektif çalışmanın amacı kriyoprezervasyonda kullanılan iki anayöntem olan— Slow Freezing ve Vitrifikasyon arasında başarı oranlarınıkarşılaştırmak ve gebelik hızını arttıracak bir prospektif metod geliştirmektir.Çalışma Gazi Üniversitesi Tüp Bebek Merkezinde 2005-2014 yıllarında300 çözme embriyo transferi siklusu yapılan hastaların arşiv dosyalarınıincelenerek yapılmıştır. Çalışmadaki sikluslar 2 grupta toplanmıştır: 1.Grup:SlowFreezing (SF); 2. Grup:Vitrifikasyon (V).Çalışma grupları arasındaki kadın yaşı, VKİ, siklus öncesi D3-FSH, D3-LH, D3-E2, TSH, sT4 değerleri, önceki İVF siklus sayısı, ayrıntılı infertilitenedenleri arasında anlamlı fark saptanmamıştır. Mevcut yaşayan çocuk sayısı İVFöncesi SF grubunda V grubuna göre anlamlı yüksek bulunmuştur (p=0,001).Çalışmada Gazi Üniversitesi Tüp Bebek Merkezinde çözme embriyotransferi yapılan vakaların sayısının yıllar bazında lineer olarak arttığı ve SFyönteminin zamanla yerini V' na bıraktığı gözlenmiştir. V grubunda vakaların%94' lük kısmına bir veya iki embriyo transferi yapılırken, SF grubunda ancak%47' sinde bir veya iki embriyo transferi yapılmıştır ve bu istatistiki anlamlıdır(p=0,001). Bu fark yasal uygulamaların etkisi ile[100] ortaya çıkmıştır. 1052004-2014 yılları arasında 1469' u erken evre (2. ve 3. gün) embriyosu ve239 adedi ise blastokist (5. ve 6. gün embriyoları) olmakla, toplamda 1708embriyo dondurulmuştur. SF grubunda 2004-2008 yılları arasında Grade 1embriyoların dondurulma hızı %4,5' ten lineer bir sekilde %33' e yükselmiştir.Yani zamanla dondurulmak üzere daha iyi grade' li embriyolar seçilmiş veteknikte tecrübe kazanılmıştır. Dondurma Grade' lerine göre iki grupkarşılaştırıldığında, V grubunda (%75,6) SF' e nazaran (%68,2) istatistiki anlamlıolarak daha fazla Grade 1 embriyo (p=0,002) ve daha az (uygun olarak, %4,4 ve%8,9) Grade 3 embriyo (p=0,001) dondurulmuştur. Çalışmada 2005-2014 yıllarıarasında transfer amaçlı toplamda 1207 adet erken evre embriyo ve 211 adetblastokist çözulmüştür. Çözme embriyo Grade' lerine göre iki grupkarşılaştırıldığında, çözme sonrası Grade A oranı V grubunda SF' e göre istatistikianlamlı olarak daha yüksek (p=0,0001), Grade C ve D oranları istatistiki anlamlıolarak daha düşüktür (P=0,001).Blastokistler sadece V grubunda dondurulduğu için gruplar arasındakarşılaştırma yapılamamıştır. Blastokist çözmede 2008-2010 yıllarında %75-%100 ile başlayan dejenere blastokist oranları teknik deneyimle ile lineer olarak%21' lere kadar azalmış ve buna benzer şekilde çözme sonrası Grade A blastokistoranları 2010 yılında %22 iken 2014 yılında %64' e bir eğilim (trend) ileyükselmiştir.Çözme sonrası embriyoların kalite Grade'lerine A dan D' ye bakıldığında,SF ile karşılaştırmada V yöntemi embriyoları istatistiki anlamlı olarak bir Grade 106daha iyi çözmüş gözükmektedir. Bir baska deyisle, embryiolar çözüldüğündeGrade A olarak çözülme hızı SF ve V sonrası sırasıyla %30 ve %51 dir.Çalışmamızda çözme sonrası embriyo yaşam oranları SF grubunda %66,8ve V grubunda %75 olup, V grubunda SF' e nazaran istatistiki alamlı olarakyüksek saptanmıştır (p=0,0006). Çözme sonrası blastokist yaşam oranı %54,5olarak saptanmıştır.Toplam vakaların klinik gebelik hızı %22,3 (54 gebelik) saptanmış veyıllara göre gebelik hızında lineer artış izlenmemiştir (p=0,28). SF grubundaçözme embriyo transferi yapılan 84 siklusun toplam %25' inde (21 gebelik ile)klinik gebelik izlenmiş olup, gebelik hızında zaman bazında lineer artışsaptanmamıştır (p=0,209). V grubunda embriyo transferi yapılan 158 siklusun%20,9' da (33 gebelik) klinik gebelik izlenmiş olup, yıllara göre gebelik hızındalineer artış trendi saptanmıştır (p=0,138). İki grubun klinik gebelik hızı arasındaYates düzeltmeli Ki-kare testi ile istatistiki anlamlı fark saptanmamıştır (p>0,05). Her iki grupta da çözme sonrası transfer başına ortalama klinik gebeliksayıları, çözme embriyo grade kalitesi düştükçe, orantılı olarak düşmüştür. Busonuçlar göz önüne alınarak, Grade' lemenin transfer sonrası gebelik hızınıpredikte edebildiği görülmektedir.Çalışmamızda endometriumun hazırlanma yöntemi çözme embriyotransferi yapılan toplam 242 siklusun %37,2' de (90 siklus) doğal, %62,8' de (152siklus) doğal olmayan sikluslardır. Çözme embriyo transferi yapılan doğalsikluslarda klinik gebelik oranı (%30), ek takviyeli sikluslardakine (%17,8) göreyüksek bulunmuştur ve bu fark istatistiki olarak anlamlı (p=0,027) saptanmıştır. 107SF grubunda çözme embriyo transferi yapılan doğal siklusların %20' sinde (3siklus), doğal olmayan siklusların % 26,1' inde (18 siklus) klinik gebeliksaptanmış olup, gebelik oranları arasındaki fark istatistiki anlamsızdır (p=0,62). Vgrubunda çözme embriyo transferi yapılan doğal siklusların klinik gebelik hızı(%32), doğal olmayan siklusların klinik gebelik hızına (%10,8) göre yükseksaptanmış olup, bu fark istatistik olarak anlamlıdır (p=0,001). Tüp BebekÜnitemizde çözme embryo transferlerinin doğal siklusta olması, özellikleVitrifikasyon grubunda gebeliği predikte edebilmektedir. Bu da bizim çözmeembriyo transfer sikluslarında doğal sikluslarla karşılaştırmada endometriumhazırlama protokollerimizin rafine edilmesi gerektiğini ortaya koymaktadır.Çalışmada toplam vakaların canlı doğum hızı %12,8 olarak saptanmıştırki, bu da toplamda klinik gebelik izlenen siklusların % 42,6' sının gebelik kaybıile sonuçlandığını göstermektedir. Dolayısıyla, gebe kalanların (%22,3) yaklaşıkyarıya yakını düşük yapmıştır.SF grubunda gebelik hızı % 25 iken doğum hızı %14,3 (12 canlı doğum)olarak saptanmıştır ve klinik gebelik izlenen %42,9 vakada gebelik kaybıizlenmiştir. V grubunda doğum hızı %12 (19 doğum) olarak saptanmıştır. Gebelikhızı %20,9 olan bu grupta vakaların %42,4' ü gebelik kaybı ile sonuçlanmıştır.SF grubunda doğumların %75' i tek ve %25' i ikiz doğum, V grubunda ise%95'i tek ve %5' i ikiz doğum saptanmıştır. Ancak gruplar arasındaki bu farkistatistiki olarak anlamlı bulunmamıştır (p>0,05).Yates düzeltmeli Ki-kare testi ile SF ve V grupları arasında yıllara görecanlı doğum oranları açısından istatistiki anlamlı fark saptanmamıştır (p>0,05).108Bu çalışma sonuçlarına göre, dondurulup çözülen embriyo yaşamoranlarına açısından SF' e nazaran V yöntemi üstün bulunmuş, fakat gebelik hızıve doğum hızı açısından iki yöntem arasında anlamlı fark saptanmamıştır.Embriyo yaşam hızı, gebelik ve doğum hızlarının bu çalışmada daha düşüksaptanmasının nedeni, dondurma öncesindeki embriyo seçim kriterilerinin cut-offdeğerlerinin daha düşük olması ve çözme sonrası sadece Grade A değil diğerdüşük grade' li embriyoların da transfer edilmesi şeklinde yorumlanmıştır.

The aim of this retrospective study is to compare the success rates betweentwo main methods used in cryopreservation: Slow Freezing (SF) and Vitrification(V) and to develop a prospective method to increase the pregnancy rate.The archive files of 300 patients who underwent thawing embryo transfercycles in IVF Center of Gazi University between years 2005-2014 were analysed.Cycles in the study were collected in two groups: Group 1:Slow Freezing (SF);Group 2: Vitrification (V).There were no difference between groups in terms of age, BMI, serumlevels of D3-FSH, D3-LH, D3-E2, TSH, fT4 before cycle, number of previousIVF cycles, detailed cause of infertility. The number of living children before IVFin the SF group significantly higher than those of V (p = 0.001).In this study we observed, the linear increase of thawed embryo transfercases in IVF Center of Gazi University and the SF method replaced by V in time.In the V group one or two embryos transferred to 94% of patients, while in the SFgroup, only to 47%, and this difference was statistically significant (p = 0.001).This difference has emerged due to the legal practice [100].A total of 1708 embryos were cryopreserved between 2004-2014 years,1469 of them were early stage (day 2 and day 3) embryos and 239 were 110blastocysts (day 5 and day 6 embryos). The Freeze rate of Grade 1 embryos in SFgroup showed linear increase from 4,5% to 33% between 2004-2008 years. Soembryos with better grade were selected and through the technical experience intime. Comparing pre thaw grades between two groups, Grade 1 embryos in groupV (%75,6)were statistically significantly higher (p=0,002) and Grade 3 embryos(4,4%) were statistically significantly lower (p=0,001) compared to group SF(respectively, 68,2% and 8,9%). A total of 1207 early stage embryos and 211blastocysts thawed between 2005-2014 year in study. After thaw Grade A embryosin group V statistically significantly higher (p=0,0001), in concordance Grade Band C embryos were statistically significantly lower than group SF (p=0,001).Because of blastocysts cryopreserved only in group V though possible ingroup SF, comparison could not be made between groups. Blastocyst thawing inbetween 2008-2010 were with 75%-100% of degenerating rate is linearlydecreased to 21% by gaiınıng technical dexterity through 2014, similer Grade Aafter thaw rate 22% in 2010 increased in trend to 64% respectively.Group V seems to thaw embryos a grade significantly better than groupSF. In other words, thaw rate of Grade A embryos, in SF and V groups were 30%and 51% respectively.The survival rate of embryos after thaw were significant higher (p=0,0006)in group V (75%) than in SF (66,8%). Survival rate of blastocysts after thaw were54,5%.Cumulative clinical pregnancy rate (CPR) was 22,3% (54 pregnancies),linear increase of rate was not observed (p=0,28). In SF group CPR was 25% (21 111pregnancies), linear increase of CPR was not observed in time. In the V groupCPR was 20,9% (33 pregnancies), and linear increase was not observed in time(p=0,138), but in trend. There were no significant difference between the CPR oftwo groups (p> 0.05).The average number of clinical pregnancies per thawed embryo transfer inboth groups, is decreased proportionally as thawed embryo quality gradedecreased. It seems that, Grade of transferred embryos are strong predict of CPR.Endometrial preparation in 242 thaw cycles of our study were 37,2% (90cycles) natural and 62,8% (152 cycles) artificial cycles. In natural cycles CPRafter thaw embryo transfer is observed higher (30%) than artificial cycles (17,8%)(p=0,027). In SF group CPR were 20% (3 cycles) in natural cycles and 26% (18cycles) in artificial cycles similar (p=0,62). In V group same rates were 32% and10,8%, better respectively (p=0,001). This means, in our IVF Unit thaw embryotransfer in natural cycles is able to predict pregnacy, in V group better and inartificial cycles were need rafinement.The live birth rate of total cases were found 12.8%, this shows that 42,6%of clinical pregnancy is resulted with the loss of the pregnancy in this study.SF group birth rate was found 14.3% (12 live births) and 42,9% is resultedwith loss of pregnancy. In V group similar rates were 12% (19 live births) and42,4% respectively.In the SF group 75% of total live births were singleton and 25% weretwins, in V group same rates were similar, 95% and 5% respectively (p> 0.05).112SF and V groups in terms of live birth rates by years were similar (p>0.05).According to our results frozen-thawed embryo survival rate of group Vwas found superior compared to SF group, but there was no significant differencein pregnancy rate and live birth rate between two methods. Strict embryo selectioncut-off values as Grade A only to predict CPR before and after cryopreservationand strict transfer of thawed embryos policy is needed with improing the artificialendometrial stimulation.