Perlit tozlarının, in vitro ortamda fare alveollar makrofajları üzerindeki etkilerinin araştırılması

Abstract

ÖZET Bu çalışmamızda, Balb / C serisi beyaz farelerde Trakeobronşial Lavaj ( TBL ) yoluyla elde edilen ve si- tosantrifüj yöntemi uygulanarak lamel üzerine yayılmış AIM' lara, RPMI 1640 kültür ortamı içinde, in vitro şartlarda mikronize perlitin etkileri araştırılmıştır. Kontrol grubunda 12, perlit grubunda 20 hayvan alınarak, her bir hayvandan TBL yoluyla elde edilmiş ve sitosantrifüj yoluyla lameller üzerine yayılmış AIM' 1ar, % 10 fetal sığır serumu, 100 ü / mi penicilin, 100 meg / mi streptomisin, 2 mM L - Glutamine bulunan RPMI 1640 kültür ortamı içinde 37°C lik etüvde 2 saat süreyle inkübe edildi, inkübasyon sonrası kontrol ve perlit grubunda 1 saat, 3 saat, 6 saat ve 24 saatlik sürelerde AİM' ların RPMI 1640 kültür ortamı içinde kültürleri yapıldı. Perlit grubunda kültür ortamı içine 250 mikrogram / mi lilitre sterilize edilmiş mikronize perlit tozu katıldı. 1 saat, 3 saat, 6 saat ve 24 saatlik sürelerin sonunda, lameller üzerindeki AIM' 1ar fikse edilerek, Giemsa ile bo yandıktan sonra, preparat haline getirilerek faz - kontrast m i kroskobunda değer 1 end irildi. Kontrol grubunda ve perlit grubundaki hayvanlarda kültür saatlerine göre, hücre sayısı ve özellikleri yönünden farklılıklar saptanmış olup, 1 saatlik ve 24 saatlik gruplarda lameller üzerine çok iyi tutunmuş aktif hareketli, belirgin pseudopod uzantıları olan AİM* ların varlığı gözlen di. 3 saatlik ve 6 saatlik gruplarda hücre sayısında azalma ve küresel formlu hücrelerin bulunuşu dikkati çekti.48 Perlit grubunda 1 saatlik ve 24 saatlik gruplarda çok sayıda AIM1 da perlit parçalarını fagosite etmeye yönelik akt i vasyon göz 1 end i. Çalışmamızda % 71 - 75 oranında Sİ02 bulunan mikronize perlitin fare AİM. kültür ortamına katıldığında, 1 saatlik, 3 saatlik ve 6 saatlik sürelerde, AİM' ların üzerinde belirgin bir toksik etkisini gösterecek bulgu saptayamadık. Yalnızca 24 saatlik gruptaki AİM' larda çok sayıda irili, ufaklı fagozomların bulunuşu ve kontrol grubunda benzer sitoplazmik özelliklerin göz 1 enmey i ş i, AİM' 1ar üzerinde mikronize perlitten meydana gelmiş değişiklikler olarak düşünülmüştür. Konunun açıklığa kavuşması için AİM. kültürlerinde uzun süreli perlit etkilerinin araştırılmasına gereksinim vardır.

SUMMARY The present study aims at investigating the effect of micron i zed perlite on the AM ( Alveolar Macrophage )' s obtained by Tracheobronchial Lavage ( TBL ) in white mice of Balb / C series { strain ) and spread on coverslips using the cytocentrifuge method, under in vitro conditions and within RPMI 1640 culture medium. The AM' s obtained by TBL from 12 experimental animals in the control group and 20 animals in the perlite group and spread on coverslips by the cytocentrifuge method were incubated for 2 hours in an incubator of 37°C in RPMI 1640 culture medium consisting of 10 % fetal bovine serum, 100 Ü / ml penicillin, 100 meg / ml streptomycin and 2 mM L - Glutamine. The AM's were cultivated in RPMI 1640 culture medium for 1, 3, 6 and 24 hours in both the control and the perlite groups following incubation. In the perlite group, 250 microgram / milliliter of sterilized micronized perlite dust was added to the culture medium. At the and of periods of 1, 3, 6 and 24 hours, the AM's on the coverslips were made into preparation by fixation and staining with Giemsa and studied under the phase - contrast microscope. In the 1 and 24 hour groups, differences were observed in the experimental animals in the control and perlite groups with respect to cell number and characteristics with varying culture periods, with the presence being noticed of active AM's fast adherent to the coverslips and possessing prominent pseudopodial extensions. In the 3 and 6 hour50 groups, decreased cell number and presence of spherical cells were remarkable. In the 1 and 24 hour perlite groups, activity directed at phagocytosis of perlite particles was observed in a considerable number of AM's. Following addition of micronized perlite containing 71 ->. 75 % Si02 to the mouse AM culture medium, no finding was obtained denoting significant toxic effect on the AM's within periods of 1,3 and 6 hours. However, presence of phagosomes of varying size in the AM's of the 24 hour group and absence of similar cytoplasmic properties from the control group has been interpreted as changes in the AM's induced by micronized perlite. The authors feel that, for better elucidation of the subject, investigation of long - term effects of perlite on AM culture is called for.