Doğal hücresel sitotoksisitenin kolorimetrik bir yöntem ile ölçümü

Abstract

ÖZET Bu çalışmada doğal hücresel sitotoksisite ölçümünde kullanılabilecek yeni bir yöntem geliştirildi. Deneylerde, kristal viyole ve iyot bileşiği ile boyanan maya hücreleri hedef, periferal kan len fositleri ise effektör hücre olarak kullanıldı. Effektör hücrelerle mikrotitrasyon plaklarında enkübe edilen maya hücreleri, duvar zedesi sonucu tuttukları boyayı ortama bıraktılar. Absorbans değeri, ELÎSA cihazı ile değerlendirildi. Sitotoksik aktivite,Antikandidiyal Kolorimetrik îndeks olarak gösterildi. Renk yoğunluğu, parçalanan hedef hücre sayısı ile doğru orantılı idi. Enkübasyon süresi, hedef: effektör oram, monosit ve otolog serum ilavesi gibi çeşitli parametrelerin 51 deney üzerine etkileri incelendi. Alınan sonuçlar, Cr salınım ve koloni inhibisyon yöntemleri ile uyumlu bulundu. Yöntemin sitotoksik aktivitedeki değişmeleri saptayabildiğinin gösterilmesi amacı ile, Serratia marcescens LPS ile aktivasyon deneyi yapıldı. AKKİ'in önemli ölçüde arttığı gözlendi. Bu çalışmada tarif edilen kolorimetrik yöntem, doğal hücresel sitotoksisite ölçümünde Cr51 salınım deneyi yerine kullanılabilecek ucuz, güvenilir ve kısa süreli bir yöntemdir.

SUMMARY Measurement of Natural Cell -mediated Cytotoxicity by a Colorimetric Assay In this study, a new colorimetric assay that can be used to measure natural cell -mediated cytotoxicity, has been developed. In the experiments, yeast cells that had been stained with crystal violet and iodine, were used as target and peripheral blood lympho cytes as effector cells. The yeast cells were incubated with effectors in microplates and released the dye as a result of cell wall damage. The absorbance value was quantitated using an ELISA plate reader. The cytotoxicity was assessed as Anticandidial Colorimetric Index (ACCI). The absorbance value was directly proportional to the number of the damaged target cells. The influence of various parameters, including incubation time, effector to target cell ratio / monocyte depletion and addition of autologous serum, were evaluated. The results were 51 comparable to those obtained by Cr release and colony inhibition assays. In order to show that the assay could be used to detect the changes in cytotoxicity, activation experiments with Serratia marcescens LPS, were also performed. It was observed that the ACCI values increased significantly. In conclusion, the colorimetric assay described in this study, is a reliable, rapid and cost-efficient method that can be used as an alternative to Cr51 -release assay, for measuring natural cell-mediated cytotoxicity.