Sephadex G-150, G-200 ile haptoglobin-hemoglobin bağlama kapasitesi ve haptoglobin tip tayin metodu

Abstract

-77- ÖZ ET Serum haptoglobin miktar ve tip tayini klinik teş- hisde gün geçtikçe önem kazanmaktadır. Haptoglobin miktarı çeşitli hastalıkların tanımında önemli olup tip tayini de antropolojik ve genetik tetkikler yönünden Önemlidir. Haptoglobin molekülünün kimyasal özelliklerinden faydalanılarak geliştirilen çeşitli metodlarla haptoglobin miktarı ve tiplendirilmesi yapılmıştır. Biz de bu amaca yönelik Sephadex jel filtrasyonu ile haptoglobin miktarını ve tiplendirilmesi tayinine çalış tık. Sephadex G-150 ile Hp-Hb bağlama kapasitesini ve Sephadex G-2 00 ile haptoglobin moleküler ağırlığını hesap- lıyarak tiplendirme yaptık. Sephadex metodunun doğruluğunu kanıtlamak için Smithies' in tarif ettiği Nişasta Jel Elektro- forez Tekniğini kullanarak her iki metodun uygunluğunu gös terdik. Araştırmamız için numuneler, 1977 yılının Mart-Temmuz ayları arasında Fakültemizin Kliniklerinde yatan toplam 30 hastadan (15 Erkek, 15 Kadın) ve normal değerleri saptamak için V.N-. personelden 34 :serum (21 Erkek, 13 Kadın) 'dan temin edildi.-78-..Sephadeks G-150 ile Haptoglobin-Hemoglobin bağlama kapasitesi, 34 normal kişide (21 Erkek, 13 Kadın) ortalama 94,8 mg/100 mi olarak hesaplandı. 14 malign hastada ise 163.8 * 121.9 mg/100 mi olarak saptandı. Birkaç Cushing sendromlu vakada ise normalden çok yüksek değerler kaydedil di. Malign hastalıklarda ve Cushing sendromunda Haptoglobin- Hemoglobin bağlama kapasitesinin arttığı görüşüne varıldı. Ayrıca numuneleri Kadm-Erkek ve Tip 2-1 Tip 2-2 diye guruplandırarak Hp-Hb bağlama kapasitelerinin ortala maları arası fark testi yapıldığında istatistiksel açıdan önemli fark gözlenmedi. Sephadex G-200 ile haptoglobin* moleküler ağırlığı hesaplanarak tiplendirilme yapıldı. Molekül ağırlığa bağlı tiplendirilme klasik kitaplarda belirlenen tiplerin molekü ler ağırlığı esas alınarak yapıldı. 30 numunede bir tane Tip 1-1, 15 tane Tip 2-1 ve 14 tane Tip 2-2 kaydedildi. Tip 1-1' in tek bir molekül ağırlığı, Tip 2-1' İn 9 değişik mole küler ağırlığı, Tip 2-2' nin ise 4 değişik moleküler ağırlığı kaydedildi. Tip İri' in moleküler ağırlığı 100.000 civarında, Tip 2-1' in 100.000-200.000-300.000 civarında ve Tip 2-2' nin 200.000-300.000-500.000 civarında bulundu. Tip 1-1'in homo- jenik yapıda, Tip 2-1 ve Tip 2-2'nin ise heterojik yapıda olduğu gözlendi. Numunelerin a2-globulin değeri, Hp-Hb kapasitesi ve moleküler ağırlıkları arasındaki ilişki Kısmi Korelasyon ve Çoklu Korelasyon testi ile İncelendiğinde şu bulgular kaydedildi; /-79- 1- ou-globulin sabit tutulursa Hp-Hb kapasitesi ile molekü- ler ağırlık arasındaki etkileşim %12 oranında, 2- Hp-Hb kapasitesi sabit tutulduğunda a, -Globulin ile mole küller ağırlık arasındaki etkileşim %1 oranında, 3- Moleküler ağırlık sabit tutulduğunda ou-Globulin ile Hp-Hb arasındaki etkileşim %2 oranındadır. çoklu korelasyon testinde ise etkileşim %14 oranında bulundu. Sonuç olarak Hp-Hb miktarının moleküler ağırlığını etkilediği söylenebilir. Sephadex metodu ile t iplendir ilmenin doğruluğunu kanıtlamak için Smithies' in tarif ettiği Nişasta Jel Elektroforez Metodu ile karşılaştırılma yapıldığında, her iki metodun uygunluğu görüldü. Nişasta jel elektroforez metodunda 2 vakada haptoglo bin miktarı (O) bulundu» Sephadex G-150 ile haptoglobin mik tarı 10,5, 25.5 mg/100 mi olarak hesaplandı. Bu da bize Sephadeks Metodunun daha hassas olduğunu gösterdi» Sephadex metodunda, kullanılan maddelerin temini kolay ve ucuz olup ayrıca çok iyi yetişmiş teknik elemana ihtiyaç olmadığından ve de hassasiyeti ne deniyle uygun bir metod olduğu sonucuna varıldı.