Mycobacterium Tuberculosis`in polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile erken tanısı

Abstract

- 39- 6-ÖZET Dünya Sağlık Örgütünün raporlarına göre; dünya populasyonunun 1/3'ü M. tuberculosis'le enfekte durumdadır. 1990 yılında 8 milyon kişinin tüberküloz hastası olduğu ve bunların 2.6-2.9 milyonunun öldüğü bildirilmiştir. Son on yılda DNA analiz tekniklerinin gelişmesi, tıp biliminin ilerlemesinde önemli katkılar sağlamıştır.DNA analizleriyle; bir çok genetik hastalığın prenatal tanısı ve taşıyıcıların belirlenmesinin yanısıra çok sayıda enfeksiyon hastalıklarının tanısı, etken patojene ait genetik materyalin saptanmasıyla yapılmaktadır. Hastaların klinik örneklerinde M. tuberculosis'in PCR yöntemiyle saptanması, ilk kez 1989 yılında yapılmış ve daha sonra diğer rutin laboratuvarlarında kullanılmaya başlanmıştır. DNA analiz teknikleri; klasik mikroskobik tanımlama ve kültür yöntemlerine göre çok hızlı ve duyarlı olduğundan üstün metotlardır.Bu metotlarda, klinik örnekte 10 bakteri olduğunda bile M. tuberculosis'in tanısı iki farklı yöntemden yararlanılarak yapılabilmektedir. Bu tez çalışmasında; klinik örneklerdeki M. tuberculosis'in saptanması her iki DNA analiz yöntemi kullanılarak yapılmıştır. Yöntemlerden ilki; M. tuberculosis DNA'sına spesifik primerlerin yardımıyla klinik örneklerdeki basilin PCR yöntemiyle amplifiye edilmesi, ikincisi ise; PCR ürünlerini prob olarak kullanarak yapılan dot blot analiz yöntemidir. Bu tezin amacı ; M. tuberculosis'in tanısında Polimeraz Zincir Reaksiyonu(PCR) yöntemini kullanmak ve elde edilen PCR sonuçlarını bakteriyolojik yöntemler olan kültür ve preparatlann mikroskobik incelenmesine dayalı sonuçlarla karşılaştırmaktır. Bu tezde; PCR metodunun, laboratuvar şartlarımızda çok hassas, hızlı ve rutin kullanım için etkili olduğu gösterilmiştir.

40- 7-SUMMARY According to the World Health Organization reports, one-third of the world population is infected with M. tuberculosis. In 1990, about eight million people were reported to have tuberculosis and 2.6 to 2.9 million of them died from it. The development of DNA analysis techniques in the last decade resulted in breakthrough in medicine. Not only carter detection and prenatal diagnosis in several genetic disorders by DNA analysis are now possible, but also diagnosis of an increasing number of infectious diseases is carried out directly by detecting the genetic material of the pathogen by using PCR. Detection of M. tuberculosis in patient samples by PCR method was first reported in 1989 and has been employed in several laboratories. DNA analysis methods are superior to the traditional methods of microscopic identification and mycobacterial culture, because of its high sensitivity and speed. These methods claimed that M. tuberculosis could be detected even though 10 bacterium were present in clinical samples. In this thesis; the detection M. tuberculosis in clinical samples was carried out by using two DNA methods. The first method is the amplification of the `bacillus` in clinical samples by the use of `primers` spesific to M. tuberculosis's DNA and the second is dot blot method carried out by using PCR products as probe. The aim of the thesis was to compare the PCR to the currently used assay techniques of mycobacteria culture and microscopic detection. In this thesis; the PCR method was shown to be faster and more sensitive under our laboratory conditions and it could be efficiently employed for routine use.