Mide biyopsi örneklerinde polimeraz zincir tepkimesi (PCR) ve retriksiyon fragman uzunluk polimorfizmi (RELP) analizleri ile Helicobacter Pylori`nin tanımlanması ve tiplendirilmesi

Abstract

VI. ÖZET Helicobacter pylori enfeksiyonu dünyada en sık rastlanan gastrointestinal sistem enfeksiyonudur. Peptik ülser ve gastritin etyopotogenezinde önemli bir yer tutmaktadır. H. pylori tanısında histopatolojik ve mikrobiyolojik yöntemlerin yanında son yıllarda moleküler biyolojik yöntemlerin kullanılması gerektiği ileri sürülmüştür. Bu yöntemler arasında Polimeraz Zincir Tepkimesi (PCR) ve bunu takiben Restriksiyon Fragman Uzunluk Polimorfizm (RFLP) analizinin tanı, tiplendirme ve tedavinin takibi açısından en duyarlı yöntem olduğu bildirilmiştir. Çalışma kapsamına mide ağrısı ve yanması yakınmaları olan 17 kadın, 18 erkek hastadan alınan mide biyopsi örnekleri alınmıştır. PCR yöntemi ile Helicobacter pylori DNA'sını üreaz A ve üreaz B genlerine özgü primerler kullanarak çoğalttıktan sonra restriksiyon enzim kesimleri ile RFLP tiplendirmesi yapmayı amaçladık. Tedavi öncesi ve sonrası alınan örneklerde yapılan deneyler sonucunda tedavi öncesi 32 olguda Helicobacter pylori varlığı saptandı. Tedavi sonrası kontrol amacıyla alınan 21 örneğin 8'inde her iki gen bölgesi çoğaltılarak bakteri (+) olarak bulundu. Sonuç olarak H. pylori tanısında PCR yönteminin, nükslerin saptanmasında ise RFLP ile tiplendirmenin duyarlı bir yöntem olduğu sonucuna varıldı.

-63- VII. SUMMARY Helicobacter pylori infection is the most common gastrointestinal tract infection in the world. This bacteria plays an important role regarding etiopathogenesis of peptic ulcer and gastritis. In recent years molecular biological methods were presented for detection Helicobacter pylori in addition to hystopathological and microbiological methods. Polymerase Chain Reaction and following Restriction Fragment Length Polymorphism analysis are very sensitive methods for diagnosis and scheduling the treatment of the Helicobacter pylori infection. These methods are very sensitive in distinguishing Helicobacter pylori strains. In this study, gastric biopsy specimens from 1 7 female and 1 8 male patients with peptic ulcer and chronic gastritis symptoms were presented. Biopsy materials were evaluated with Polymerase Chain Reaction and Restriction Fragment Length Polymorphism analysis methods. Urease A and urease B gene primers were used for PCR amplification. RFLP analysis of PCR amplified DNAs were used to differentiate Helicobacter pylori strains. Biopsy results of 32 patients revealed that Helicobacter pylori was positive in pretreatment specimens. In posttreatment specimens period 8 of 21 patients' PCR results with gene primers have shown the recurrence of Helicobacter pylori infection.-64- As a result, PCR is a sensitive method to determine the Helicobacter pylori infection. RFLP which is another effective method in order to demonstrate the reinfection of the Helicobacter pylori.