Mikroplate yöntemi ile kan gruplarının saptanması

Abstract

49 ÖZET Vücut sıvıları ve lekelerinin kimliklendirilmesi ve paternite araştırmaları Adli Bilimlerin popüler konularındandır. Bu amaçlarla eritrosit antijenlerinin ayırd edilmesi geleneksel yöntemlerdendir. Adli Bilimlerde kan gruplarının ayırd edilmesi ve kullanımı ile ilgili çok sayıda kaynak vardır. Kan gruplarının tayininde en çok ve yaygın olarak eritrosit agglutinasyonuna dayanan yöntemler kullanılmaktadır. Bu alanda mikroyöntemler gibi yeni yaklaşımlar, agglutinasyon teknolojisinde yeni umutlar vaadetmektedir. Bu çalışma mikroyöntemlerden biri olan ve basitliği-güvenirliği nedeniyle tavsiye edilen microplate yönteminin Anabilim Dalımıza oturtularak uygulanması amacı ile planlanmıştır. Bu amaçla kaynaklarda önerilen yöntem evreleri ve planlanan deneyler 220 sağlıklı gönüllüden alınan kanda çalışılmıştır. Yöntemin spesifıkliği, zaman ve ayıraç yönünden ekonomikliliğini geliştirmek için 450 farklı deney yapılmıştır. Yapılan deneylerde; yıkanmış eritrositlerin 1/10'luk bromelin solüsyonu ile hazırlanan %2'lik süspansiyonlarının en uygun olduğu, an ti serumların bovin albumin ile 1/4'lük konsantrasyonlarda en iyi okunan sonuçlan verdikleri, 30 microlitre eritrosit süspansiyonu ve 40 microlitre dilüe antiserumun güvenilir sonuç almak için yeterli olduğu, hücre süspansiyonu ve antiserum karışımının 15 dakikalık enkübasy ondan soma 1000 rpm'de 30 saniye santrifüjünün sonuçların çıplak gözle okunabilmesi ve fotoğraflanabilmesi için yeterli olduğu gözlenmiştir.

50 SUMMARY Identification of the body fluids and stains and Paternity testings are popüler subjects of Forensic Sciences, antijenic determination of red cells is the traditional technique for these purposes. There is much literature available on the use and interpretation of blood grouping in forensic sciences. All commonly used blood grouping tests depend on agglutination of the red cells. New approches such as microprocedures offer much promise in agglutination technology. This study has heen planned to settle one of the microprocedures, the microplate technique, which is recommended for its simplisity and reliability, in our department. In this study the microplate technique has been tested on the fresh blood samples, withdrawn 220 healthy donors. 450 laboratory tests performed to evaluate the specifity, economy of time and equipment of the technique. The tests were performed to evaluate the most suitable suspending media for red cells showed that 1/10 bromelin solution in 2% dilution is convinient for this micro procedure. The comparison of the antiserum dilution medias and concentrations revealed that 1/4 diluted antiserum in bovin albumin provide the best reading of the test results. It was shown that the use of 30 microlitres of red cell suspention and 40 microliters of diluted antiserum is enough to obtain reliable results. The tests results indicated that the use of 15 minutes incubation and 1000 rpm centrifugation for 30 seconds of the mixture of the cell suspention and antiserum provides clear interpretation for macroscopic examination and also photography.