Melatonin ve anologlarının antioksidan aktivitesinin akım injeksiyon-kemiluminesans yöntemiyle belirlenmesi ve melatoninin reperfüzyon aritmileri üzerine etkinliğinin araştırılması

Abstract

79 VI. ÖZET Bu çalışmanın amacı luminol kemiluminesansının akım injeksiyon analiz yöntemiyle izlenmesiyle melatonin ve yapısal benzeri indollerin, süperoksit (ksantin-ksantin oksidaz reaksiyonu ile oluşturulan), hidrojen peroksit (H202), hipoklorit anyonu (OCl) (NaOCl'den oluşan), hidroksil (OH) (02-FeS04-karbonat ile oluşturulan) veya peroksinitrit (ONOO) (taze sentezlenmiş) reaktif oksijen türleri üzerine direkt antioksidan etkinliğinin araştırılmasıdır. KL sinyalinin melatonin, D,L-triptofan, serotonin veya askorbik asit ile inhibisyonu ölçülmüştür. LoglC50 değerleri: 02` İçin -2.6±0.1 M, -2.8±0.2 M, -5±0.004 M, -4.8±0.01M; H202 için -3±0.02 M, -3±0.2 M, -6±0,1, -6±0.01M M; OCl için -4.7±0.04 M, -4±0.07 M, -5.7±0.06 M, -5.8±0.06 M; OH için -2.8±0,1 M, -4±0.2 M, -5.7±0.1, -5.2±0.2 M ve ONOO için -2±0.03 M, - 1.5±0.03 M, -5±0.2, -4.2±0.2 M olarak bulunmuştur. Sonuçlar melatoninin sulu çözeltide reaktif oksijen türlerine karşı sınırlı bir süpürücü aktivitesi olduğunu göstermektedir. Ayrıca, bu çalışmada melatoninin anesteziye sıçanda reperfüzyon aritmilerini etkileme yeteneğini ve melatonini tüketilmiş hayvanları kullanarak endojen melatoninin katkısını araştırmayı amaçladık. Endojen melatonin deplesyonu, hayvanların bir hafta süreyle 24 saat aydınlık periyoduna bırakılmasıyla yapılmıştır. Tüm gruplarda koroner arter ligasyonu yöntemiyle 10 dk iskemi 10 dk reperfüzyon uygulanmıştır. Melatonini tüketilmiş grup ve kontrol grubundaki hayvanlarda aritmi parametreleri (ventriküler takikardi, ventriküler fibrilasyon ve ektopik atım sayısı) bakımından anlamlı bir fark yoktur. Koroner oklüzyondan 30 dk önce melatonin uygulaması (0.05, 0.5 and 5.0 mg.kg`1, ip) kontrol ve melatonini tüketilmiş hayvanlarla karşılaştırıldığında reperfüzyon aritmilerini anlamlı olarak etkilememiştir. Hiç bir uygulama başlangıç hemodinamik değerlerini değiştirmemiştir. Melatonin, bir antioksidan ve serbest radikal süpürücü olmasına rağmen anesteziye sıçanda reperfüzyon aritmileri üzerinde anlamlı bir değişikliğe neden olmamıştır.

80 VII. SUMMARY The purpose of the present study is, by using FIA to monitor luminol-CL, to investigate the direct antioxidant capacity of melatonin and related indoles on ROS-superoxide (02`°) (derived from xanthine-xanthine oxidase reaction), hydrogen peroxide (H2O2), hypochlorite anion (OCl`) (derived from NaOCl), hydroxyl (OH) (generated from 02-FeS04-carbonate) or peroxym'trite (ONOO`) (freshly synthesised). Inhibition of CL responses by melatonin, DL-tryptophan, serotonin (5-HT) or ascorbic acid (well-characterised, chain-breaking antioxidant) was measured. LoglC50 values of these were found -2.6±0.1 M, -2.8±0.2 M, -5±0.004 M, -4.8±0.01 M for 02`, -3±0.02 M, -3±0.2 M, -6±0,1, -6±0.01M for H202, -4.7±0.04M, -4±0.07 M, -5.7±0.06 M, -5.8±0.06M for OCl, -2.8±0,1M, -4±0.2M, -5.7±0.1, -5.2±0.2 M for OH and -2±0.03 M, -1.5±0.03M, -5±0.2, -4.2±0.2 M for ONOO', respectively. Data showed that, in aqueous solutions, melatonin exhibited a limited scavenging capacity toward ROS. We also aimed to investigate the ability of melatonin to influence reperfusion arrhythmias in anaesthetised rats and also examine the involvement of endogenous melatonin by using melatonin-depleted animals. Endogenous melatonin depletion was made by maintaining the rats on 24 h light cycle for a week. In all the groups, 10 min occlusion and 10 min reperfusion period were induced by using coronary ligation method. There was no significant difference between melatonin- depleted or control animals in regard of arrhythmia parameters (incidence of ventricular tachycardia and ventricular fibrillation and total ventricular ectopic beats). Melatonin administration (0.05, 0.5 and 5.0 mg.kg'1, ip), 30 min before coronary occlusion did not influence reperfusion arrhythmias compared to control and melatonin-depleted rats. None of the treatments affected the baseline of haemodynamics. In spite of melatonin's effects as an antioxidant or free radical scavenger, we were not able to show significant contribution of melatonin on reperfusion arrhythmias in anaesthetised rats.