Tekrarlanan kontrollü ovaryan hiperstimülasyon`un (KOH) over rezervi üzerine etkisinin phosphatase and tensın homologue deleted on chromosome ten (PTEN) yolağı üzerinden araştırılması

Abstract

Ovaryumlardan en ideal sayı ve kalitede oosit elde etmek için `aynı siklusta çok sayıda follikülün geliştirilmesi` olarak tanımlanan kontrollü ovarian hiperstimülasyon (KOH), infertilite olgularının artması ile birlikte, yardımcı üreme tekniklerinin (YÜT) vazgeçilmez bir parçası haline gelmiştir. YÜT'deki ilerlemelere rağmen gebelik sağlamak için hastaların çoğunda birden fazla KOH uygulaması yapılması gerekmektedir. Tekrarlanan KOH uygulamaların, over rezervini temsil eden primordiyal foliküllerin, dormansitesinin korunması, canlılığı ve aktivasyonunu kontrol eden faktörler üzerine olan etkisi oldukça merak uyandırmaktadır. Bu nedenle çalışmamızda, over rezervinin korunmasında görev alan PTEN ve FOXO3'ün ifadelenmelerinde, KOH protokol yöntemleri uygulandıktan sonra oluşabilecek olası değişimleri göstermeyi amaçladık. Çalışmamızda kullanılan, genç dönemlerindeki (8 haftalık) 18 adet Wistar albino cinsi dişi sıçan her grupta 6 denek olacak şekilde rastgele Kontrol, Deney-1 (3 tekrar) ve Deney-2 (5 tekrar) gruplarına ayrıldı. Deney gruplarına 10 IU/0,1ml PMSG ve bu işlemden 48 saat sonra 10 IU/0,1ml hCG enjeksiyonunu kapsayan KOH protokolü uygulandı. Bu işlem Deney-1 ve Deney-2 gruplarına 1'er hafta arayla sırasıyla, 3 ve 5 kez uygulandı. Kontrol gruplarına ise aynı işlemler 0,1ml 0.9% NaCl solüsyonu ile gerçekleştirildi. Deney bitiminde, alınan kan örnekleri süpernatanları ayrıldı ve ELİSA analizleri yapılana kadar -20°C'de saklandı. Ovaryum dokuları ise ışık mikroskobik incelemeler için %10'luk nötral formaldehit solüsyonu içerisine konuldu. H-E ile boyanan histolojik kesitlerde, ovaryum foliküllerinin sayısı fiziksel disektör yöntemi kullanılarak belirlendi. Bununla birlikte PTEN, FOXO3 ve LH-R moleküllerinin ekspresyonlarını IHC yöntemlerle değerlendirildi. Çalışmamız sonucunda, KOH uygulmasının, PIK3 hücre içi sinyal yolağının temel bileşenlerinden olan ve over rezervini koruduğu bilinen PTEN ve FOXO3 proteinleri ile LH-R ekspresyon düzeylerini azalttığı, over rezerv belirteçlerinden olan FSH, E2 ve LH gibi hormonların seviyelerini etkilediği, ovaryumun histolojik yapısı, oosit morfolojisi ve sayısı üzerinde olumsuz etkilere sebep olduğu izlenmiştir.Anahtar Kelimeler : Kontrollü ovaryan hiperstimülasyon, over rezervi, PTEN, FOXO3

Controlled ovarian hyperstimulation (COH), defined as `The development of multiple follicles on the same cycle` to obtain the ideal number and quality of oocytes from the ovaries, has become an indispensable part of assisted reproductive techniques (ART), with an increase in infertility cases. Despite the advances in ART, more than one application of COH is required in the majority of patients to provide pregnancy. The effect of repeated COH applications on the factors controlling the preservation, viability and activation of primordial follicles, which represent over-reserve makes high sensation. For this reason, we aimed to show possible changes in the expression of PTEN and FOXO3, which are involved in preserving the over-reserve, after applying the COH protocol methods. 18 young Wistar albino female rats (8 weeks old) used in our study were randomly assigned to Control, Experiment-1 (3 repetitions) and Experiment-2 (5 repetitions) groups as 6 subjects in each group. Experimental groups were treated with 10 IU / 0,1ml PMSG and a COH protocol consisting of 10 IU / 0,1ml hCG injection after 48 hours. This procedure was applied 3 and 5 times to Experiment-1 and Experiment-2 groups, respectively, with a weekly period. For the control groups, the same procedures were performed with 0,1 ml of 0,9% NaCl solution. At the end of the experiment, the supernatants of the blood samples taken were separated and stored at -20 ° C until ELISA analysis. The ovarium tissues were placed in 10% neutral formaldehyde solution for light microscopic examinations. In histological sections stained with H-E, the number of ovarian follicles was determined using the physical disector method. However, the expression of PTEN, FOXO3 and LH-R molecules was evaluated by IHC methods. As a result of our study, it was concluded that COH administration reduces the expression levels of PTEN and FOXO3 proteins and LH-R, which are among the essential components of the PIK3 intracellular signaling pathway and also it affects the levels of hormones such as FSH, E2 and LH, which are over-reserve markers, and causes adverse effects on the histological structure, oocyte morphology and number of ovaries.Key Words : Controlled ovarian hyperstimulation, overian reserve, PTEN, FOXO3