Bacillus subtilis`in gen aktarımı yöntemiyle elde edilecek recombinant suşları ile atıksulardan amilaz, selüloz ve ksilan uzaklaştırılması üzerine araştırmalar

Abstract

HI ÖZ Organizmalara sahip olmadıkları genleri aktararak onları enfeksiyonlara, soğuğa, sıcağa, tuza, radyasyona, pestisitlere dirençli yapmak, verimliliklerini arttırmak veya üremelerim hızlandırmak gibi çeşitli amaçlarla genlerin bir organizmadan alınıp diğer bir organizmaya transferi üzerinde çok çalışılan bir konudur. Bu çalışmada bazı Bacillus subtilis suşlanna enzim aktivitelerinin arttırılması ve yeni özelliklerin kazandırılması için gen aktarımı yapılmıştır. Bacillus subtilis RSKK 243, a-amilaz enzim aktivitesi olmayan ve pUBUO plazmidi, dolayısıyla kanamisin antibiyotiğine direnç geni içermeyen bir sustur. Bacillus subtilis RSKK 243 susuna elektroporasyon tekniği ile pUBİ 10 + a-amilaz geni içeren plazmid aktarılmış ve sonuçta kanamisinli ortamda üreyip a-amilaz enzimini salgıladığı saptanmıştır. Enzimin spesifik aktivitesi 0.60 uM/dak.mg.protein bulunmuştur. B.subtilis RSKK 389, ksilanaz enzim aktivitesi gösteren fakat pUBUO plazmidi içermediği için kanamisine direnci olmayan bir sustur. Gene elektroporasyon tekniği ile B.subtilis RSKK 389 susuna pUBUO + ksilanaz geni içeren plazmid aktarılmış ve sonuçta kanamisinli ortamda üreyebildiği ve ksilanaz enzimi salgılayabildiği tespit edilmiştir. Rekombinant susta enzim miktarındaki artış % 24 olarak tespit edilmiştir. Rekombinant bakterilerin zamana bağlı substrat yıkımları incelenmiş ve en fazla yıkımın 2. günde olduğu gözlenmiştir.

IV ABSTRACT Studies based on the gene transfers between organisms in order to make them resistant to the some conditions such as infections, cold, heat, radiation, pesticides and to increase their production and reproductive rate, have became important in the recent years. In this study, gene transfer has been done to Bacillus subtilis strains, to give them new characteristics and increase their enzyme activity. Bacillus subtilis RSKK-243 has no a-amylase activity and does not carry kanamicine antibiotic resistance genes due to lack of pUBHO plasmid. A PUB 110 plasmid carrying a- amylase gene, has been transferred to Bacillus subtilis RSKK-243 strain by means of electroporation, and as a result it was observed that these strains were capable to growth in the medium containing kanamicine and produce a-amylase enzyme. Specific activity of enzyme was found to be 0.60 uM/min.mg.protein. B. subtilis RSKK-389 shows xylanase activity but it doesn't resistant to kanamicin due to lack of pUBHO plasmid. A PUB110 plasmid carrying xylanase gene, has also been transferred to Bacillus subtilis RSKK-389 strain by means of electroporation, and as a result it was determined that this strains were able to grown in kanamicine containing medium, and produce xylanase enzyme. In the recombinant strain, the enzyme activity increase was observed to be 24 %. Substrate degradate of recombinant strain in time had been observed and it was found that the maximum degradate had occurred on the second day.