Rho kinaz inhibitörü fasudil`in pankreas karsinoma hücrelerinde sitotoksisite, apoptoz ve metastaz ilişkisinin araştırılması

Abstract

Bu çalışmanın amacı, pankreas kanseri hücre hattı olan BxPC-3 hücre hattına rho kinaz inhibitörü olan fasudil uygulanarak sitotoksisite, apoptoz ve metastaz'a olan etkilerini araştırmaktır. Bu araştırmada, xCELLigence DP eş zamanlı hücre ana-lizi cihazında yapılan hücre deneyleri sonucunda uygun hücre sayısının BxPc-3 hüc-re hattı için 12500, Fasudil uygulama saatinin ise 25 saat olduğu belirlenmiştir. Toksik doz olan IC50 değeri 7,2835x106 M bulunmuştur. Metastaz araştırması için farklı dozlarda (10mM, 2mM, 0,2mM, 0,02 mM) fasudil kullanılmış fakat BxPc-3 hücrelerinin besine (FBS) duyarlı bir metastaz göstermediği anlaşılmıştır. Kaspaz-3, Kaspaz-8, ve Kaspaz-9 gen ifadesi düzeyinin ölçümleri için 24 ve 48 saat sürelerde total RNA'lar saflaştırımış, 2µM ve 0,2 µM Fasudil uygulanarak 24 ve 48 saatlerde qRT-PCR yöntemi ile yapılmıştır. Elde edilen sonuçlarda kontrole göre 24. ve 48. saatler de 2 µM ve 0,2 µM'da Kaspaz-3 ve Kaspaz-9'da 1,5 kat artış gözlemlenirken Kaspaz-8'de artış ya da azalış gözlemlenememiştir. Ayrıca PE Aktif Kaspaz-3 testinde kontrol grubu ile ilaç uygulaması yapılan hücreler arasında Kaspaz-3'ün (%25,1) aktif olduğu gözlemlenmiştir.

The aim of this study is investigation of the cytotoxic, apototic and metastatic effect of administration of fasudil, effector of rho kinase, onto the BXPC-3 pancreatic carcinoma cell line. Optimum cell unit per well is found as 12500 cells by xCELLigence DP system. Fasudil treatment period is also determined to be 25 hours. Result of the IC50 value of 7,2835x10-6 M concentration. The aplications of time/dose dependent Fasudil (10mM, 2mM, 0,2mM, 0,02 mM) were applied for metastasis. But according to migration assay in xCELLigence DP system, BxPC-3 cells have not shown PBS dependent migration. The levels of caspase-3 and caspase-9 were significantly increase effect by measuring with Quantative Real-Time PCR at 24 and 48 hours with 2µM and 0,02µM fasudil respectively. Caspase-8 were not significant effect of administration in a time-dose dependent manner. The result of Flow Cytometric Active Caspaze-3 PE assay was shown significant effect of Caspase-3 (%25.1) activity.