Alkalen fosfataz düzeyi düşük olan ve klinik olarak hipofosfatazya düşünülen hastalarda alkalen fosfataz geni dizi analizi ile moleküler tanının araştırılması hipofosfatazya düşünülen hastalarda alkalen fosfataz geni dizi analizi ile moleküler tanının araştırılması

Abstract

AMAÇ: Bu çalışmada, serum alkalen fosfataz (ALP) değeri düşük olan ve klinikolarak hipofosfatazya düşünülen olgularda moleküler tanının araştırılması amaçlanmıştır.GEREÇ VE YÖNTEM: Ege Üniversitesi Hastanesi'nde Ocak 2104 – Eylül 2018yılları arasında, serum alkalen fosfataz seviyeleri 40 U/L ve altında olan, 0-20 yaş arasındakiolgular kaydedildi. Bu olguların hastanemizin elektronik hasta dosyasında kayıtlı tüm ALPdeğerlerine bakıldı ve hastane kayıtları retrospektif olarak incelendi. Daha önceki tetkiklerindeALP değerleri normal ve yüksek olan hastalar dışlandı. Kayıtlar değerlendiğinde hipofosfatazyadışında ALP düşüklüğüne neden olabilecek klinik tablosu, ilaç kullanımı gibi öyküsü olanolgular çalışma listesinden çıkarıldı. Bu kriterlere göre dışlandıktan sonrası 273 kişi listeyealındı. İkinci kez bu seçilen olgular değerlendirildi. Bu değerlendirme sonrası 147 olgu çalışmalistesinden çıkarıldı. Geriye kalan 126 olgu, hastane sistemimizdeki kayıtlı telefon numaralarıile arandı. ALP düşüklüğüne neden olabilecek nedenler detaylı olarak anlatıldı ve kontrolmuayeneye çağrıldı. Çalışmaya 30 hasta alındı. Olguların kontrol bakılarında detaylıanamnezleri not edildi, soy geçmişleri incelendi, fizik bakıları yapıldı. Kontrolde serum ALPdeğerleri, serum kalsiyum, fosfor, idrar kalsiyum/kreatinin tetkükleri çalışıldı. Hipofosfatazyakesin tanısı açısından ALPL geni dizi analizi incelendi.BULGULAR: Çalışmaya alınan olan 30 olgunun ortanca yaş 20.35'ti (minimum:6.1,maksimum 22.5). Çalışma grubundaki hastaların 3'ü erkek, 27'si kızdı. Beş olgunun dizianalizinde 4 olguda heterozigot patojenik özellikte mutasyon ve 1 olguda tek allelinde delesyonsaptandı. Bu mutasyonlar; heterozigot missense c.657G>T (p.Met219Ile) mutasyonu,heterozigot c.648+1G>A mutasyonu, heterozigot missense c.542C>T (p.Ser181Leu)mutasyonu, heterozigot c.862+1G>C mutasyonuydu. Mutasyon/delesyon saptanan grup ile dizianalizi normal olan grup anamnez, klinik özellikler ve laboratuvar bulguları açısındankarşılaştırıldı. Kontrolde bakılan ALP düzeyleri, mutasyon/delesyon saptanan grupta dahadüşüktü. Kontrol ALP değerleri mutasyon/delesyon grubunda 30 U/L (minimum:23U/L;maksimum 45U/L), dizi analizi normal sonuçlanan grupta ise 41U/L'ydi (minimum:26U/L;maksimum:194U/L). Mutasyon/delesyon saptananlarda ALP ortalamasının ortanca değeri 27U/L (minimum 22.5 U/L; maksimum:39 U/L), diğer grupta ise 37.6 U/L'ydi (minimum:22,5U/L; maksimum:113,5 U/L). Her iki grubun ALP düzeyleri ve ALP ortalamaları arasındaki farkanlamlıydı(p:0.036;p.0.028). ACMG (Ameriacn College of Medicine Genetics and Genomics)2015 kriterlerine göre patojenik mutasyon saptadığımız olguların birinde infantil dönemde ivtravmaya bağlı sağ kolda kırık öyküsü mevcuttu. Diğer olgumuzda (olgu 2) göğüsdeformitesinin varlığı göze çarpmaktaydı. Olgu 3'te ise çocukluk çağı döneminde başlamışolan, fizik bakısında belirgin skolyozu farkedildi. Bu hastamızın kemik dansitometrisindekemik yoğunluğu azalmıştı. Olgu 5'te klinik bulgu olarak hipofosfatazya açısından anlamlıolabilecek, infantil dönemde ortaya çıkan nöbetler, fizik bakısında boy kısalığı, genu valgus,kemik yoğunluğunda belirgin azalma mevcuttu. Delesyon saptanan olgumuzda çocuklukçağında 2 kez travmaya bağlı fraktür geliştiği öğrenildi. Fizik bakısında ise boy kısalığı dışındapatolojik bulgu yoktu.SONUÇ: Çalışmamızda dizi analizinde mutasyon ve delesyon saptadığımız olgulardaALP değerlerinin dizi analizi normal olarak sonuçlanan olgulara kıyasla daha düşük olduğugörülmektedir. ALP sınır değerini daha düşük belirlememiz, diğer çalışmalara göre dahayüksek sayıda dizi analizinde patojenik değişimleri olan olguları yakalamamızı sağlamıştır.Hipofosfatazya ağır formundan hafif formuna kadar çeşitli klinik bulgu verebilir. İskelet sistemibulguları (kemik deformiteleri, boy kısalığı, sık fraktürler vb…) başta olmak üzere diğerbulguları ile birlikte ALP düşüklüğü olan olgularda hipofosfatazya olabileceği aklımızdançıkarılmamalıdır.

OBJECTIVE: In this study, we aimed to investigate the molecular diagnosis ofpatients with low alkaline phosphatase levels and who were thought to have hypophosphatasiaclinically.MATERIAL AND METHODS: During a period from January 2104 to October 2018at Ege University Hospital, patients with serum alkaline phosphatase levels less than 40 U / Land aged 0-20 years were recorded.. We searched all ALP values recorded in the electronicpatient file of our hospital and hospital records. Patients who had normal and high ALP valueswith previous tests were excluded.When the records were evaluated, cases with a history ofclinical situation and drug use, which could lead to decrease ALP levels other thanhypophosphatasia, were excluded from the study list. Following this exclusion, 273 people wereincluded in the study. The selected cases were evaluated for the second time. After thisevaluation, 147 cases were excluded. The remaining 126 cases were called with the registeredphone numbers in our hospital system. The causes of low ALP levels were explained in detailsand they were called for control examination. Thirty patients were included in the study.Detailed anamnesis of the cases, the family histories were noted, and we performed theirphysical examinations. The family tree was drawn. Serum ALP levels were re-studied, andserum calcium, phosphorus, urine calcium / creatinine levels were examined. For definitediagnosis of hypophosphatasia, we performed ALPL gene sequence analysis from the bloodsamples.RESULTS: The median age of the 30 patients included in the study was 20.35(minimum: 6.1, maximum 22.5). In the study group, 3 patients were male and 27 were female.In five patients, heterozygous pathogenic mutations were detected in 4 cases and the singleallele deletion was detected in one case. These mutations were the heterozygous missensec.657G>T (p.Met219Ile) mutation, heterozygous c.648 + 1G> A mutation, heterozygousmissense c.542C> T (p.Ser181Leu) mutation, heterozygous c.862 + 1G> C mutation. The groupwith mutation / deletion group and the normal group analysis were compared with anamnesis,clinical features and laboratory findings. Control ALP levels and mean ALP levels were lowerin the mutation / deletion group. Control ALP values were 30 U / L (minimum: 23U / L;maximum 45 U / L) in the mutation / deletion group, and 41U / L (minimum: 26U / L;maximum: 194U / L) in the group with normal sequence analysis. There was a significantdifference between ALP levels of both groups (p: 0.036). When the ALP mean values of the vicases were compared, the difference between the two groups was also significant (p: 0.028).The median value of ALP was 27 U / L (minimum 22.5 U / L; maximum: 39 U / L) in themutation / deletion group and 37.6 U / L (minimum: 22.5 U / L; maximum: 113,5 U / L) in theother group. In one of the cases with pathogenic mutation detected according to ACMG 2015criteria, we found right arm fracture due to trauma in infantile period. In our other case (case2), the presence of chest deformity was prominent. In case 3, significant scoliosis was detectedin childhood. In this patient, Z score was decreased in the bone densitometry. In case 5, therewere seizures occurring in infantile period, which could be significant for hypophosphatasiaand in the physical examination there were short stature, genu valgus, a significant decrease ofbone density. In our case, we learned the history fracture due to trauma for 2 times in childhood.İn the physical examination we noted short stature.CONCLUSION: In our study, compared with normal sequence analysed group,mutation / deletion detected group had lower ALP values. Compared to other studies ;our lowerALP limit value helped us to detect more cases with pathogenic changes in sequence analyse.Hypophosphatase may present a variety of clinical signs ranging from severe to mild. It shouldbe kept in mind that hypophosphatasia may be present in cases with skeletal system findings(bone deformities, short stature, frequent fractures, etc.) and other symptoms as well as lowALP.