Kolajen proteini ile H-ras aktif hücrelerinin etkileşimi

Abstract

Düşük molekül ağırlıklı GTP-bağlı protein süper ailesinin üyesi olan ras proteinler, normal selüler proliferasyonunu düzenleyen kritik sinyal yolaklarının aktifliğini kontrolde rol almışlardır. Aktif ras proteinlerinin genellikle insan tümörlerinin gelişimine katkıda bulunduğu gösterilmiştir.Kolajen proteinleri memelilerde çok miktarda bulunurlar ve dokuların biyokimyasal yapıları için önemlidirler. Ayrıca hücre adezyonu, taşınması, büyümesi, morfogenez ve yara iyileşmesinde önemli role sahiptirler. Bunun aksine insan kanser tiplerinin birçoğunda kolajen protein geninde mutasyon olduğu saptanmıştır.Yapılan bu çalışmada, 5RP7 H-ras aktif hücrelerinin kolajen tip IV proteinine bağlanma kapasitesi saptanarak kolajen tip IV' e bağlı hücrelerin apoptotik indeksinin belirlenmesi amaçlanmıştır.Sıçan 5RP7 hücrelerinin büyüme eğrisinin çıkarılması için tripan mavisi ile boyama yöntemi, hücrelerin kolajene bağlanma oranlarının belirlenmesi için MTT ve kristal mor boyama yöntemleri, kolajene bağlı hücrelerin apoptotik indeksinin belirlenmesi için ise agoroz jel elektroforez yöntemi kullanılmıştır.5RP7 hücrelerinin büyümesi zamana göre tripan mavisi ile belirlenmiştir. Bu sonuca göre, diğer çalışmalar için optimum hücre sayısı 12,5x104 ml/hücre olarak tespit edilmiştir. 5RP7 hücrelerinin kolajen tip IV' ün değişik konsantrasyonlarına bağlanma kapasitesi MTT deneyi ve kristal mor yöntemi ile araştırılmıştır. Her iki metotun sonucuna göre, hücrelerin düşük kolajen tip IV dilüsyonunda (2.5 µg/ml) bile kontrol hücrelerine göre oldukça yüksek bağlandığı tespit edilmiştir. DNA fragmentasyonu deneyine göre kolajen tip IV' e bağlı 5RP7 hücreleri apoptoza gitmeyerek DNA merdiven görüntüsü göstermemiştir. Hücreler kolajen tip IV' e kuvvetlice bağlanmıştır.

As membres of a large superfamily of low-molecular-weight GTP-binding protein, ras proteins have played essential roles in controlling the activity of several crucial signaling pathways that regulate normal cellular proliferation. Activation mutations within the ras proteins frequently contribute to the development of human tumors.Collagens are the most abundant proteins in mammals. Collagen-rich extracellular matrices are not only critically impotant for the biomechanical properties of tissues, but are also intimately involved in cell adhesion and migration during growth, differentiation, morphogenesis and wound healing.The aim of this study was that determination of adhesion capacities of H-ras activite cells, 5RP7 to collogen type IV protein and also to find out how apoptotic process effected by adhering the cells to collagen type IV.The rate of 5RP7 cell growth was determined by trypan blue during the time points. The results showed that 12.5x104 cells/ml was optimum cell number for other experiments. The adhesive capacity of 5RP7 cells to various dilution of collagen type IV was investigated with either MTT assay or crystal violet method. The data obtaired from both methods showed that the cells had a higher adhesive capacity to even at 2.5 µg/ml collogen type IV compeared to control cells. Apoptotic DNA ladder was not appeared in 5RP7 cells adhered to collogen type IV by DNA fragmentation assay. The cells were bind to collogen type IV firmly.