İmmünosupresyonda lipocortinin yeri

Abstract

-60- ö Z E T Lipocortinin immünosupresyondaki yerini saptamak amacı ile tertiplenen bu invitro çalışmada ağırlıkları 130-170 g arasında olan erkek albino sıçanlardan elde edilen peritoneal hücreler kullanıldı. RPMI 1640 medyum içinde seyreltilmiş 10x10 hücre ihtiva eden tüpler %95 ot ve %5 GOj karışımı altında 37°c'lik çalkalayıcı su bonyosunda 16 saat süre ile inkübe edildiler. Kontrol grubunu oluşturan tüplere sadece medyum ilave edilir ken, diğer tüplere sıra ile 10~ M DeKamethason, 10 ug/ml CS-A ve her ikisi birlikte ilave edilerek oluşan AA miktar ları ölçüldü. 16 saatlik inkübasyondan sonra santrifügasyonla elde edilen süpernatanlardaki AA miktarı kontrol tüplerde 21.34 ± 3.48 pg/ml, Dexamethason grubunda 12.79 ± 6.41 pg/ml, Ö5-A ve her iki ilacın birlikte kullanıldığı tüplerde ise sıra ile 17.68 ± 2.38 pg ve 14.04 ± 4.01 pg/ml olarak saptandı. Immünosupressif ajanların ilavesi ile AA miktarlarında gözlenen değişiklikler çok önemli idi. înkübasyon periodu sonunda kontrol hücrelerin sentezlediği toplam protein miktarı 1178.81 ± 190.45 ııg/ml iken Dexamethason ve C5-A ile inkübe edilen hücrelerde sırası ile 1658.92 + 234.64 ve 1385.05 ± 202.60 ug/ml olarak bulundu. Her iki immünosupressif ilacın birlikte kullanıldığı tüplerde ise 1751.58 ± 296.87 ııg/ml protein mevcuttu. Protein miktarlarında kontrol grubuna göre saptanan artışlar istatis-?61- tiksel çok anlamlı idi. îmmünosupressif ajanlarla inkübe edilen Zk10 hücrenin süpernatanının sephadex G 50-80 kolonundan geçirilmesi ile elde edilen 10 dakikalık fraksiyonlardaki proteinlerin miktarı molekül ağırlıkları ve antifosfolipaz At aktivitesi incelendi. Dexamet has onun etkisi ile 8-12. fraksiyonlarda çıkan ve molekül ağırlıkları 32.500 ile 47.500 arasında değişen proteinlerde artış olduğu halde CS-A, molekül ağırlıkları 52.500 ile 67.500 arasında olan ve 6 ile 7. fraksiyonlarda çıkan proteinlerde artışa neden oldu. Bu fraksiyonlardan sadece 05-A'nın neden olduğu 6. fraksiyondaki ve Dexamet hasonun neden olduğu 11. fraksiyonda çıkan proteinlerin AA` i inhibe edici aktivitesi mevcuttu. Fraksiyon 6 ve ll'de çıkan antifosfolipaz At aktiviteli proteinlerin her ikiside T hücre proliferasyonunu etkilemediği gibi makrofajların fagosit ik aktivitesini de sadece Dexamethasonun etkisi ile oluşan ve 11. fraksiyondan çıkan lipocortinin azalttığı gözlendi. Sonuç olarak Dexamethasona bağlı olarak peritoneal hücrelerde sentezlenen lipocortin aktiviteli proteinin T hücrelerinin proliferasyonunu etkilemediği, fakat fagositik aktiviteyi anlamlı şekilde azalttığı, CS-A ile oluşan 62.500- 67.500 molekül ağırlığı arasındaki proteinin lipocortin aktivitesine sahip olmakla birlikte T hücresi ve makrofaj fagositik aktivitesine etkisiz olduğu, dolayısıyla lipocortinin spesifik immün sistemde doğrudan etkili olmadığı halde, antiinf lamatuar etki ile nonspesifik immün sistemde rol oynadığı ortaya çıktı. Bu iki immünosupresif ajanın birlikte kullanılmasının ne lipocortin miktarında, ne de akti vitesinde önemli katkısı gözlenmedi.

-62- SUMMARY The purpose of this study was to investigate the effect of the immunosupressive agents on the in vitro rat peritoneal cells responses, in this study, the albino rats weighing 130-170 g were used in this study. Peritoneal cells were incubated at 37*0 under 5% CO, and %95 Oj for 16 hrs in rpmi-1640 medium containing immunosupressive agents such as glucocorticoids and cyclosporin-A which are the most frequently used for the supressing the immune system. The synthesis of the amount of protein as well as their molecular weights and ant i -phospho lipase A, activities and arachidonic acid content of incubated cells as a response to 10~ M Dexamethasone, 10 ug/ml Cyclosporin-A and combination of these two drugs were measured at the end of the incubation period. The mean protein level in the cells incubated with 10~ ug/ml of OS-A rosed significantly from the control value Of 1178.81 ± 190.45 ug/ml to 1658.92 ± 234.64 and 1385.05 i 202.60 ug/ml respectively. The combination of these two drugs also caused an increase in the mean levels of synthetized proteins (1751. 58 ± 296.87 ug/ml, p<0.01). The mean arachidonic acid released from the cells incubated in the control conditions was 21.34 ± 3.48 pg/ml. incubation with dexamethasone and cs-A + dexamethasone caused-63- a significant decreased in AA production. The mean level was 12.79 ± 6.41 and 14.04 ± 4.01 pg/ml respectively. Where as OS-A alone produced a mild inhibition of AA levels during this period. The supernatants of the incubated cells were loaded on the column of sephadex G 50-80 and the eluent of ten minutes were collected and subjected for the analyses of their ant i -phospho lipase A, by hplc as well as their molecular weights. Dexamethasone stimulated the synthesis of the proteins which are fractioned between 8 to 12 where as CS-A caused an increase in the levels of proteins with the higher molecular weights. The ant i -phospho lipase At activities were detected only in the fraction of 11 of Dexamethasone group and fraction 6 of the C5-A treated eel Is. Both fractiones which have lipocortin activity showed no effect on the proliferation of T cells, only protein from fraction 11 had an inhibitory effect on phagocytic activities of macrophages.