Beta globin geninin lokus kontrol bölgesi hipersensitif bölge -3 içerisindeki polimorfizmlerin fetal hemoglobin düzeyi üzerine etkilerinin araştırılması

Abstract

ÖZET ? globin lokus kontrol bölgesi (LCR) yapısal genlerden bir kaç kilobaz uzakta lokalize olan dominant kontrol bölgenin ilk tanımlanan örneğidir. LCR tüm lokus boyunca güçlü bir enhancer aktiveteye sahiptir, ?LCR dört güçlü eritroid spesifik DNaz hipersensitif bölge içerir (5* HS-Î32»3»4), LCR aktivitesinin çoğu HS-2, 3 ve 4 ile ilişkilidir, ? globin lokus kontrol bölgesinin hipersensitif bölge-3, (3 benzeri globin genlerinin önemli bir regülatörü olarak gösterilir. Bu çalışma düşük hemoglobin F düzeyine sahip 10 P talasemi major, yüksek hemoglobin F düzeyine sahip 10 ? talasemi intermedia ve 10 sağlıklı bireyin bulunduğu kontrol grubundan oluşmaktadır. Çalışmanın amacı; ? talasemi major ve intermedia hastalarda ? globin geni lokus kontrol bölgesi hipersensitif bölge-3 içerisindeki polimorfizimlerîn direkt sekans tekniği kullanılarak gösterilmesidir. ?-HS-3 içerisindeki 7334. pozisyonda bulduğumuz guanin (G) delesyonun hem ? talasemi major ve intermedia hem de kontrol grubunda olması bize bir polimorfizm olabileceğini düşündürdü. 7370. pozisyondaki G delesyonu sadece üç p talasemi major hastada bulundu. Bu mutasyonun bulunduğu bölge GATA-Î, Oct-İ ve NF-E2 gibi genel ve eritroid spesifik regülatör faktörler için bağlanım bölgesi içerir. Biz bu mutasyonun kromatin yapı üzerine etkileyebileceğini düşünmekteyiz. 7415. pozisyondaki G delesyonu sadece bir ? talasemi major hastada bulundu. Bu bölge GATA-I, YY1 ve CSBP-2 transkripsiyon faktörlerini bağladığı için hem yhemde e globin gen regulasyonu üzerine etki edebilir. Bu üç mutasyon HS-3 kor bölge dışında yer almasına rağmen, sadece bir ? talasemi major hastada 7521. pozisyonda bulduğumuz G delesyonu HS-3 kor bölge içerisinde yer almaktadır. Bu mutasyonun tüm ? benzeri globin genlerinin promotor bölgesindeki korunmuş CACCC motifine bağlanma ve diğer transkripsiyon faktörleri ile ilişkiye girme yeteneğinde olan Spl ve GATA-1 bağlanım alanına yakın olması mutasyonun fetal globin gen ifadesi üzerine etki edebileceğini bize düşündürmüştür.

SUMMARY ? globin locus control region (LCR) is the first identified example of a dominant control region located at a distance of many kilobases from the structural genes. ît has a very strong enhancer activity extending over the entire locus. ?-LCR consists of four strong erythroid-speeific DNase hypersensitive sites (5' HS-1, 2, 3 and 4). Most of the LCR activity is associated with 5' HS-2, 3 and 4. Hypersensitive site-3 (HS-3) of the (3- giobin locus control region has been implicated as an important regulator of the p-like globin genes. In this project, we have set up three groups which are ? thalassemia major including 10 patients who have low level of hemoglobin F, ? thalassemia intermedia including 10 patients who have high level of HbF, and control group including 10 healthy individuals. The aim of the present study is to investigate polymorphisms into hypersensitive site-3 of the ? globin gene locus control region in ? thalassemia major patients and ? thalassemia intermedia patients by using direct DNA sequencing tecnique. According to our results, guanin (G) deletion in 7334 position of the ? HS-3 was found both p thalassemia major, intermedia patients and control group. It is likely to be a polymorphism. G deletion in 7370, position of the ? HS-3 was only found in three ? thalassemia major patients. This segment includes binding sites for ubiquitous and erythroid specific regulatory factors such as GATA-1, Oct-1 and NF-E2. We could suggest that it can effect the formation of an open chromatin structure. G deletion in 7415. position of the p HS-3 was observed only a P thalassemia patient. This region binds GATA-1, YY1 and CSBP-2 transcription factors. Therefore, this mutation can effect both y and e globin gene regulation. Although G deletions in 7334, 7370 and 7415 position are outside of P HS- 3 core region, there was a G deletion in 7521. position.inside of ? HS-3 core region, in a P thalassemia patient. We think this mutation, near the GATA-1 and Spl binding sites, can effect fetal globin gen expression since Spl is able to not only bind to conserved CACCC motifs but also interact with other trans factors in the promoter regions of all ? like globin genes.