Kültüre edilmiş rat aortik kas hücrelerinde anjiyotensin II uyarımlı ile p42/p44 MAPK (ERK-1/2) fosforilasyonunda fosfolipaz C ve Protein Kinaz C`nin rolü

Abstract

ÖZET Renin-anjiotensin sisteminin aktif bir komponenti olan Anjiyotensin II (Ang II), hipertansiyon, aterosklerozis, kardiovasküler sistem hastalıkları ve kan basıncının kontrolünde önemli bir rol oynar. Ang H'nin vasküler düz kas hücrelerinde ATİ reseptörleri üzerinden G proteinine bağlı reseptörler aracılığıyla farklı sinyal iletim yollarım uyararak ERK 1/2 olarakta bilinen p42/p44 Mitojen Aktive edici Protein Kinaz (MAPK)'ları aktif hale geçirir. Ang II ile uyaran sonrasında hemen işleyen sinyal iletiminde G proteinleri aracılığıyla fosfolipaz C (PLC) aktive olur ve fosfatidil inositolün hidrolizi ile inositol trifosfat (IP3) ve diaçilgliserol (D AG) oluşur. D AG, PKC'yi uyarırken IP3 hücre içi kalsiyum konsantrasyonunu yükseltir ve vasküler kontraksiyonlan başlattığı gibi MAPK aktive edebilir. Bu çalışmamızda ratların aortasından izole edilen vasküler düz kas hücreleri kültür ortamında üretildikten sonra Ang II ile uyarılarak p42/p44 MAPK fosforilasyonunda PLC ve PKC'nin etkisi araştırılmıştır. Rat aortasından izole edilen vasküler düz kas hücrelerinin saflığı immünohistokimyasal teknik kullanılarak ot- aktin varlığı ile gösterilmiştir. Ang II uyarımı ile p42/p44 MAPK fosforilasyonu western blot yöntemi ile, araştırmak istenilen her bir metabolik yol için uygun inhibitörler kullanılarak analiz edilmiştir. Sonuç olarak vasküler düz kas hücre kültürlerinde, Ang II uyarımı Ang H'nin ATİ reseptörü üzerinden MAPK aktivasyonunu hızlı bir şekilde arttırmıştır. Ang II indüklü MAPK aktivasyonu PLC inhibitörü olan U73122 ile tamamen baskılanmıştır. Ang II uyarımlı MAPK aktivasyonu üzerine PKC inhibitörü olan GF109203X'in herhangi bir etkisi saptanamamıştır. Her iki inhibitörün birlikte kullanımı Ang II uyarımlı MAPK aktivasyonu tamamen baskılamıştır. Anahtar Kelimeler: PLC, PKC, anjiyotensin II, p42/p44 MAPK

ABSTRACT Angiotensin II (Ang II), is the active component of the renin-angiotensin system which has an important role in atherosclerosis, hypertension, pathogenesis of cardiovascular diseases and regulating blood pressure. It was shown that, in vascular smooth muscle cells (VSMC), by stimulating Gq protein through ATI receptors, Ang II activates various signal transduction pathways which were known as ERKİ -2 or p42/p44 Mitogen Activated Protein Kinase (MAPK). These immediate signal transduction processes are, G protein mediated activation of phospholipase C (PLC), leading to phosphatidylinositol hydrolysis, formation of inositol trisphosphate (IP3) and diacylglycerol accumulation (DAG), increase in cytosolic free calcium concentration (Ca+2), activation of protein kinase C (PKC), and vascular contractions / MAPK activations. VSMC cultured, used in the experiments, showed 99% positive immunosteining of smooth muscle a-actin antibody. This study was aimed to investigate whether or not PLC or PKC activation have a role in MAPK phosphorylation after stimulation with Ang II in VSMC cultured. Phosphorylation was shown using western-blott techniques with specific phospho-antibodies against MAPK proteins. In cultured rat vascular smooth muscle cells, angiotensin II (Ang II) induced a rapid increase in mitogen activated protein kinase (MAPK) activity through the Ang II type 1 receptor. Ang II induced MAPK activity was abolished by the phospholipase C inhibitor, U73122. The Ang II-induced MAPK activation was not affected by the protein kinase C inhibitor, GF109203X. Ang II induced MAPK activity was abolished by the with each other inhibitors. Keywords: PLC, PKC, anjiyotensin II, p42/p44 MAPK