Farelerde erken gebelik boyunca uterusta bazı notch sinyal yolağı üyelerinin ekspresyonu

Abstract

Memelilerde gebeliğin sağlıklı bir şekilde gerçekleşmesi ve ilerlemesinde birçok faktör rol almaktadır. Fertilizasyondan sonra embriyonun preimplantif dönem gelişimi ve implantasyon ile desidualizasyonun sağlıklı gelişimi, başarılı gebeliğin kurulmasında temel oluşturmaktadır. Bu olaylar heterojen hücre toplulukları içeren uterusta gerçekleşir. Preimplantif gelişimini sağlıklı tamamlayan embriyo, senkronize bir şekilde hazırlanmış ve reseptif hale gelmiş uterusa implante olabilmektedir.Notch sinyali, hücre kaderinin belirlenmesinde ve birçok hücresel mekanizmada rolü olan, evrimsel olarak korunmuş hücreler arası bir sinyal yolağıdır. Notch sinyali doğrudan hücre-hücre temasıyla aktive olur ve embriyonik gelişimde apoptoz, hücre proliferasyonu, farklanma, hücre soyu kararı gibi birçok biyolojik fonksiyonun düzenlenmesinde gereklidir. Erken gebelikte uterus reseptivitesinin ve desidualizasyonun kurulmasında Notch sinyal yolağı üyelerinin etkileri henüz tam olarak aydınlatılamamıştır. Bu nedenle bu çalışmada, farelerde erken gebelik dönemlerinde, aktif Notch1 (NICD1) ve aktif Notch2 (NICD2) ile Notch sinyal yolağı hedef genlerinden olan HEY1 ve HES5'in uterustaki dağılımlarının ve ekspresyon miktarlarının incelemesi amaçlandı. Bu amaçla, östrus fazı, gebeliğin 1., 4., 5. ve 8. günlerinde olan fare uterus dokuları alındı ve immünohistokimyasal gözlemler için %10'luk formalin ile fikse edilerek parafin takibe alındı. Elde edilen parafin bloklardan 5-7 µm kalınlığında alınan kesitlerde, immünohistokimyasal yöntemle NICD1, NICD2, HEY1 ve HES5 proteinlerinin immünolokalizasyonları belirlendi. Western Blot analizleri için, taze uterus dokuları kullanıldı ve bu yöntemle aynı proteinlerin ekspresyon miktarları belirlendi. Elde edilen bulgulara göre; NICD1 immünoboyanması tüm gruplarda doku genelinde eksprese olurken HEY1 ile paralel şekilde gebeliğin 5. gününde artış gösterdiği; NICD2 ve HES5 immünoboyanmasının yoğunluğunun NICD1 ve HEY1'e göre daha az olduğu, NICD2'nin gebeliğin 5. gününde artış göstererek özellikle blastosiste ait olan yapılarda ve PDB'de yoğunlaştığı, 8. günde ise SDB'de çok yoğunlaştığı, ayrıca özellikle gebe olmayan östrus fazındaki fare uterusunda yoğun miktarda bulunan gebeliğin 1, 4 ve 5. günlerinde sayıları gittikçe azalan mast hücrelerinde NICD2 immünoboyanmasının çok yoğun olduğu gözlendi.Sonuç olarak, NICD1, NICD2, HEY1 ya da HES5 aracılı Notch sinyal yolağının fare uterus dokusunun gebelik için hazırlanması, implantasyon olayının gerçekleşmesi, embriyo gelişim sürecinin kontrolü için gerekli olabileceği söylenilebilir.

There are many factors that have roles at appropriate establishment and progress of mamallian pregnancy. After fertilization, the proper development of preimplantation embryo, implantation and decidualization acts a major role for setting up a succesfull pregnancy. These events happens at uterus that has heterogeneous cell types. The embryo that complete its preimplantation development properly is able to implant the receptive uterus that is prepared synchronised with preimplantive embryo.Notch signaling is an intercellular signalling pathway that is evolutionarily conserved and is involved in determination of cell fate and many cellular mechanisms. Notch signalling is activated by directly cell-cell contact and is required for organising of many biological function as apoptosis, cell proliferation, differentation, cell fate. The effects of Notch signalling pathway members on uterus receptivity and setting up decidualization at early pregnancy is not completely explained. In this study, it is aimed to analyse the distribution and the expression levels of the active Notch1 (NICD1), the active Notch2 (NICD2) and the target genes of Notch signalling pathway HEY1 and HES5 in the uerus on early pregnancy.To that end, the uterus tissues from estrus stage female mice, female mice at the 1st, 4th, 5th and 8th days of pregnancy are colected and fixed with 10% formaline and prepared for paraffin sections. The immunolocalisation of NICD1, NICD2, HEY1 ve HES5 proteins are determined on the sections that are 5-7 µm-thick via immunohistochemical method. It was observed that in early pregnant uterus NICD1 is generally expressed in the tissue and has higher levels on the 5th day of pregnancy synchronised with HEY1; the immunostaining intensities of NICD2 and HES5 are lower than NICD1 and HEY1; the experssion of NICD2 is increased on 5th day of pregnancy and is gathered on blastocyst and primary decidualization zone, on the 8th day of pregnancy its expression is increased on secondary decidualization zone, and also NICD2 is very intensively stained on mast cells that are exist in the uterus tissue of the female mice at the stage of estrus and gradually decreased on the 1st, 4th and 5th days of pregnancy.In conclusion, the members of Notch signalling pathway, NICD1 and HEY1 may be required for preparing the mice uterus for pregnancy, implantation and controlling the process of embryo development.